表达人血清白蛋白的质粒和重组菌以及它们的应用

摘要

本发明公开了一种用于表达人血清白蛋白的质粒及其应用。本发明提供的用于表达人血清白蛋白的质粒，包括表达盒甲和表达盒乙；表达盒甲依次包括：序列3所示的AOX1启动子、人血清白蛋白的编码基因、序列4所示的CYC1翻译终止子；表达盒乙依次包括序列5所示的GAP启动子、所述人血清白蛋白的编码基因、序列6所示的AOX1翻译终止子；所述人血清白蛋白为如下（1）或（2）：（1）由序列表中序列11所示的氨基酸序列组成的蛋白质；（2）将序列11的氨基酸序列经过一个或几个氨基酸残基的取代和/或缺失和/或添加且具有相同功能的由序列11衍生的蛋白质。本发明提供的重组酵母菌在生长和诱导阶段均能表达人血清白蛋白，表达量高且遗传稳定性高。

主权项

一种重组质粒，包括表达盒甲和表达盒乙；所述表达盒甲自上游至下游依次包括：序列表的序列3所示的AOX1启动子、人血清白蛋白的编码基因、序列表的序列4所示的CYC1翻译终止子；所述表达盒乙自上游至下游依次包括：序列表的序列5所示的GAP启动子、所述人血清白蛋白的编码基因、序列表的序列6所示的AOX1翻译终止子；所述人血清白蛋白为由序列表中序列11所示的氨基酸序列组成的蛋白质；所述人血清白蛋白的编码基因为如序列表中序列2自5’末端第13至1842位核苷酸所示的DNA分子；所述重组质粒还包括DNA片段丙；所述DNA片段丙包括序列表的序列7所示的ADE2启动子和序列表的序列8所示的ADE2基因，且由所述ADE2启动子启动所述ADE2基因的表达；所述重组质粒的制备方法具体如下：将用限制性内切酶BglII和BamHI双酶切重组质粒pGAGZαA‑HSA得到含有所述表达盒乙的片段插入重组质粒pPink‑HC‑HSA的BamHI酶切位点，得到所述重组质粒；所述重组质粒pPink‑HC‑HSA为在pPink‑HC载体的EcoRI和KpnI酶切位点之间插入序列表的序列2自5’末端第7‑1842位核苷酸所示的双链DNA分子得到的重组质粒；所述重组质粒pGAGZαA‑HSA为在pGAGZαA载体的BstBI和KpnI酶切位点之间插入序列表的序列2自5’末端第10‑1842位核苷酸所示的双链DNA分子得到的重组质粒。