特异工程噬菌体检测大肠杆菌O157的方法

摘要

本发明公开了特异工程噬菌体检测大肠杆菌O157的方法，采用一种用于同源重组噬菌体JL1的质粒，该质粒是由下述方法制备的：以噬菌体JL1基因组DNA为模板进行PCR扩增获得其碱基序列如序列表1所示的噬菌体JL1衣壳蛋白基因；将衣壳蛋白基因插入pMD18-T载体中；将插入了衣壳蛋白基因的pMD18-T载体和序列表2所示的荧光蛋白基因，用BssSI酶切后，连接，得pMD18-T-衣壳蛋白基因-绿色荧光蛋白基因-衣壳蛋白基因质粒。同源重组噬菌体JL1，用筛选同源重组成功的噬菌体，检出大肠杆菌O157特异性强，检出限可达10⁴CFU/mL。

主权项

一种用于同源重组噬菌体JL1的质粒，它是由下述方法制备的：1）用引物：P1：gcggggttaaagcggaaagtcaatP2：tcaacgcggtcaatagcac以噬菌体JL1基因组DNA为模板进行PCR扩增获得其碱基序列如序列表1所示的噬菌体JL1衣壳蛋白基因；2）将衣壳蛋白基因插入pMD18‑T载体中；3）将插入了衣壳蛋白基因的pMD18‑T载体和序列表2所示的荧光蛋白基因，用BssSI酶切后，连接，得pMD18‑T‑衣壳蛋白基因‑绿色荧光蛋白基因‑衣壳蛋白基因质粒。