重组人神经生长因子缺失突变体及其制备方法和用途

摘要

本发明公开了一种重组人神经生长因子缺失突变体，所述突变体是完整人神经生长因子肽链C端缺失3个氨基酸；所述突变体氨基酸序列为：如序列表SEQ ID No.1所示。或所述突变体的氨基酸序列为与SEQ ID No.1中所示的氨基酸序列具有95％以上同源性且具有神经生长因子生物学活性的氨基酸序列。本发明所述的突变体采取表达C末端缺失3个氨基酸rhNGF(rhNGF-D3)的策略来保持rhNGF的C末端完整性，并且通过此改造，相比较于rhNGF，在真核细胞中rhNGF-D3蛋白表达水平提高5～10倍，生物活性保持不变，蛋白C端均一。

主权项

一种表达载体，其特征在于该表达载体用于表达由下述方法制备得到的基因；所述方法步骤如下：根据人NGF DNA序列Genbank:NM_002506设计引物，分离人外周血白蛋白，提取其总RNA，反转录为cDNA，以此cDNA为模板，扩增人NGF缺失突变体基因；所述方法得到的基因序列如SEQ ID No.2所示，所述表达载体为真核表达载体；所述表达载体的构建方法为：将上述SEQ ID No.2所示的NGF缺失突变体基因序列经EcoRI和Sma I双酶切后，与插入到经同样双酶切的pCI‑neo载体连接，连接条件为16℃，过夜；将连接产物转化感受态细菌DH 5α，感受态菌铺于带有氨苄青霉素的LB琼脂平板上，利用PCR鉴定挑选出阳性克隆，pCI‑neo NGF‑D3质粒经DNA测序鉴定正确，质粒结构如图3所示。