基于二代测序技术的微生物单细胞转录组分析方法

摘要

本发明公开了一种基于二代测序技术的微生物单细胞转录组分析方法,包括如下步骤：(1)微生物单细胞的分离；（2）总RNA的抽提；（3）总RNA的线性扩增；（4）RNA测序文库的构建；（5）RNA测序文库的分析。使用本发明的方法不仅可以实现对不同微生物细胞个体间的基因表达差异的分析，还可以实现对极端环境下不可培养的微生物进行单细胞水平的生理功能分析；此外，这一方法可以适用于真核生物单细胞的分析，肿瘤发生和演化、干细胞的诱导及发育等重要的生物学和医学研究领域等都有着非常广阔的应用。

主权项

基于二代测序技术的微生物单细胞转录组分析方法,其特征在于包括如下步骤：(1)微生物单细胞的分离：将新鲜微生物细胞培养样本，在常温下离心收集，立即悬浮于RNA保护剂RNALater溶液中；使用显微注射系统在倒置显微镜下进行单细胞的选取分离，并将分离得到的微生物单细胞重悬于RNALater溶液中；（2）总RNA的抽提：对步骤（1）所获取的微生物单细胞，利用美国ZYMO公司的ZYMO RNA MicroPrep试剂盒进行微生物单细胞总RNA的抽提操作；（3）总RNA的线性扩增：对步骤（2）所获取的微生物单细胞总RNA进行线性扩增，利用美国NuGen公司的NuGen OneDirect试剂盒，分别进行cDNA第一链的合成、cDNA第二链的合成、SPIA扩增、扩增产物的分离纯化，得到cDNA文库；（4）RNA测序文库的构建：对步骤（3）所获取的cDNA文库，使用美国NuGen公司的NuGen Encore试剂盒，按照试剂盒说明书进行RNA测序文库的构建;（5）RNA测序文库的分析：对步骤（4）所获取的RNA测序文库，使用美国Illumina公司的Solexa Sequencer测序仪，按照说明书进行RNA测序文库的分析。