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一种浓缩纯化肝素的生产工艺，其特征在于其工艺步骤如下：（1）粗品制备：a)猪、牛、羊等哺乳动物的小肠粘膜或肝、肺等脏器的组织匀浆液中加入NaCI，搅拌、静置、过滤；b)在pH7.5‑10.5，40‑50℃下酶解数小时，NaOH调pH至8.0‑10.0，升温至50‑55℃，保温2‑4h，不断搅拌，然后快速升温到92‑95℃，保持10‑15min，趁热用80目滤网过滤，得到滤液(I)备用；c)扩张床柱Streamline50装入已处理好的强碱性阴离子交换树脂；控制温度40‑65℃，用蠕动泵调pH为7.5‑10.5，适量MTris‑HCl缓冲液自柱床底部泵入，使树脂扩张并保持平衡；保持pH值不变，将适量滤液(I)加MTris‑HCl缓冲液配制成NaCI为2‑6％，pH为7.5‑10.5的溶液，用蠕动泵通进扩张交换柱中先平衡树脂，然后反复进行离子交换，流速约为每小时2倍柱床体积，直至流出液检验无肝素，全部吸附在树脂上为止；d)然后配制适量的的2.5‑6.5％氯化钠溶液，MTris‑HCl缓冲液调节pH3‑5，以2～3个沉积床体积的缓冲液平衡/扩张柱床后，以5‑6倍沉积床体积的缓冲液除杂，整个过程控制温度15‑30℃；e)关掉蠕动泵，使D254树脂重新沉积，调节活塞至刚好在沉积床的表面，然后以向下的液流和沉积床的状态进行洗脱；f)按洗脱液体积加入1.0倍量的预冷乙醇，沉淀过夜；g)次日吸除乙醇；沉淀物用1.5‑2.5％氯化钠溶液溶解，调pH至6.0；按溶液体积加0.7倍乙醇，沉淀过夜；h)次日虹吸上清乙醇，取出沉淀物；沉淀物依序用无水乙醇、丙酮洗涤脱水；真空干燥后得肝素；（2）精品制备：a)将肝素粗品以1∶10的比例溶于3％的氯化钠溶液中，然后再用2％的氢氧化钠溶液调pH至7.5‑11.5，于室温静置数小时，真空抽滤，去沉淀物，滤液待用；b)在上述清液中加入0.05‑0.2％胰蛋白酶，在pH7.5‑10.5，35‑45℃酶解数小时，升温98‑100℃，10‑15min，趁热真空抽滤，滤液备用；c)扩张床柱Streamline50装入已处理好的强碱性阴离子交换树脂，用蠕动泵将pH7‑10，适量MTris‑HCl缓冲液自柱床底部泵入，使树脂扩张并保持平衡；d)控制温度40‑60℃，将适量滤液加MTris‑HCl缓冲液配制pH为7.5‑10.5的溶液，用蠕动泵通进扩张交换柱中反复进行离子交换，交换过程中保持pH值与温度恒定，流速约为每小时2倍柱床体积，直至流出液检验无肝素，全部吸附在树脂上为止；e)然后配制适量的预冷的2.5‑6.5％氯化钠溶液，MTris‑HCl缓冲液调节pH1‑3，以2～3个沉积床体积的缓冲液平衡/扩张柱床后，以5‑6倍沉积床体积的缓冲液除杂，整个过程控制温度3‑6℃，流速约为每小时2.5柱床体积；f)关掉蠕动泵，使树脂重新沉积，调节活塞至刚好在沉积床的表面，然后以向下的液流和沉积床的状态进行洗脱；g)按洗脱液体积加入1.0倍量的预冷乙醇，沉淀过夜；h)次日吸除乙醇；沉淀物用2％氯化钠溶液溶解，调pH至6.0；i)次日虹吸上清乙醇，取出沉淀物；沉淀物依序用无水乙醇、丙酮洗涤脱水；真空干燥后得精品肝素； |
