用于检测靶核酸的引物和其应用

摘要

本发明提供了一种扩增、检测和定量靶核酸的方法，其包括以下步骤：(a)将样品在聚合酶的存在下与一对引物接触，其中所述聚合酶为具有3’-5’外切活性的聚合酶，并且所述一对引物中的至少一个为报告引物，其特征在于：所述报告引物的3’和5’端分别标记了报告基团或淬灭基团，并且所述报告引物的3’端的一个或一个以上核苷酸与靶核酸的序列错配；(b)实施一个或多个循环扩增步骤；(c)测量报告基因的信号，由此对靶核酸进行检测和定量。本发明还提供了用于本发明方法的试剂盒和反应混合物。

主权项

一种扩增、检测和定量靶核酸的方法，其包括以下步骤：(a)将样品在聚合酶的存在下与一对引物接触，所述引物与靶核酸的序列可特异性杂交，其中所述聚合酶为具有3’‑5’外切活性的聚合酶，并且所述一对引物中的至少一个为报告引物，其特征在于：所述报告引物的3’和5’端分别标记了报告基团或淬灭基团，所述报告基团的信号被淬灭基团淬灭，并且所述报告引物的3’端具有一个或一个以上与靶核酸的序列错配的核苷酸，所述报告基团标记在错配的核苷酸上；(b)实施一个或多个循环扩增步骤，所述循环扩增步骤包括杂交步骤和核酸延长步骤，所述杂交步骤包括使由所述引物与靶核酸特异性杂交，所述核酸延长步骤包括在所述聚合酶的催化下,引物延伸和生成自所述靶核酸衍生的扩增产物；(c)测量报告基因的信号，由此对靶核酸进行检测和定量。