主权项 |
一种荸荠皮提取荸荠乙素的方法,包括提取、萃取;其特征在于:其具体步骤如下:(1)将新鲜的荸荠皮风干,粉碎,备用;以重量计,称取荸荠皮粉末1份加入提取罐中,每次加入4‑10份70%体积百分比的丙酮水溶液,在25℃下浸泡24h,浸泡3次;过滤,合并滤液,减压浓缩至膏状,获得提取物;(2)以重量计,取步骤(1)的提取物1份,分散在5份水中,制成悬浊液,每次加入5‑10份乙酸乙酯萃取,萃取3次,合并萃取液,减压浓缩至干,得萃取物;(3)以重量计,取步骤(2)的萃取物1份,加入甲醇至完全溶解,用2‑4份聚酰胺拌样,将甲醇挥发至干,装柱,连接MCI柱进行中压分离,以甲醇水溶液为流动相梯度洗脱,薄层色谱法检测,收集合并流动相浓度为70‑90%体积百分比的洗脱液,减压浓缩至干,得粗品A;(4)以重量计,取步骤(3)的粗品A1份,加入甲醇至完全溶解,加入2‑4份聚酰胺拌样,将甲醇挥发干,转入聚酰胺色谱柱进行分离,用体积比为5:1‑2:1的氯仿‑甲醇溶液洗脱,以石油醚:乙酸乙酯:甲酸=50:49:1的混合液作展开剂,用薄层色谱法检测,收集合并R<sub>f</sub>为0.7的洗脱液,减压浓缩至干,得粗品B;(5)以重量计,取步骤(4)的粗品B1份,溶于4‑8份甲醇中,加入等甲醇体积的水制成悬浊液,用Sephadex LH‑20凝胶色谱柱纯化,用甲醇洗脱,以石油醚:乙酸乙酯:甲酸=50:49:1的混合液作展开剂,用薄层色谱法检测,收集合并R<sub>f</sub>为0.7的洗脱液,减压浓缩,得粗品C;(6)以重量计,取步骤(5)的粗品C1份,溶于2‑5份甲醇中,以280nm为紫外检测波长,以62‑68%体积百分比的甲醇水溶液为流动相,用4.6mm×25cm的Zorbax SB‑C18柱进行高效液相色谱分析,用9.4mm×25cm的Zorbax SB‑C18柱进行半制备纯化,按21.38—32.51min的出峰时间,收集色谱峰中阀值不小于20mAU的洗脱液,减压浓缩,即得产品。 |