一种胃蛋白酶酶解鉴定大分子胶原蛋白或明胶的方法

摘要

本发明公开了一种胃蛋白酶酶解鉴定大分子胶原蛋白或明胶的方法。采用SDS-PAGE的方法，将不同的肽段显示出来，得到酶解片段的图谱，不同来源的胶原蛋白经过酶解后得到不同的肽段图谱，根据肽段图谱即可以区别胶原蛋白或明胶的来源。本发明方法简单、结果精确。

主权项

一种胃蛋白酶解鉴定大分子胶原蛋白或明胶的方法，其特征在于，步骤如下：(1)原料溶解：取大分子胶原蛋白或明胶溶于0.1‑0.5mol的乙酸中，配成浓度为0.1‑10mg/ml的蛋白质溶液；(2)加热变性：将蛋白质溶液在30‑100℃水浴中加热；(3)加入胃蛋白酶：再在蛋白质溶液中加入胃蛋白酶，胃蛋白酶的用量为大分子胶原蛋白或明胶用量的0.1wt％‑10wt％；(4)酶解反应：将加入胃蛋白酶的蛋白质溶液于水浴中反应10‑100分钟，反应温度为10‑60℃；(5)酶解终止：取反应后的溶液1毫升，加入胃蛋白酶抑制剂5‑50微升，终止酶解过程；(6)制备电泳样品：在终止酶解过程的蛋白质溶液中，加入浓度为0.1‑10mol/L的三羟甲基氨基甲烷溶液10‑100微升，充分混匀后于沸水浴中加热1‑10分钟；(7)电泳样品储存：将沸水浴加热后的样品立即冷却至0℃。(8)电泳：进行SDS‑PAGE电泳试验。