发明名称 一种测定病毒滴度的方法
摘要 本发明提供了一种测定病毒滴度的方法,利用病毒感染细胞的侧向角散射的变化测定病毒的滴度。本发明的方法,避免了现有技术中测定病毒滴度普遍存在的判断结果主观性过强、测定结果不够准确的问题,可以客观的记录数据,其测定结果具有优越的准确度和精密度。同时还具有操作简单、成本较低的优点,可实现更广泛的应用。
申请公布号 CN104531895A 申请公布日期 2015.04.22
申请号 CN201410690322.3 申请日期 2014.11.25
申请人 中国科学院苏州生物医学工程技术研究所 发明人 祁静;刘涛;张春;潘俊杰
分类号 C12Q1/70(2006.01)I;C12Q1/02(2006.01)I;C12R1/93(2006.01)N 主分类号 C12Q1/70(2006.01)I
代理机构 北京三聚阳光知识产权代理有限公司 11250 代理人 李敏
主权项 一种测定病毒滴度的方法,其特征在于,包括以下步骤:(1)取病毒原液以及若干个不同稀释度的病毒溶液,分别接种于待接病毒的细胞中,培养36‑60h,得到不同浓度病毒感染的细胞悬液;所述感染病毒的细胞悬液包括加入病毒原液的无稀释感染细胞悬液、加入各稀释度的病毒溶液的稀释感染细胞悬液;另取所述待接病毒的细胞悬液作为阴性对照液;(2)分别测量步骤1)中所述感染病毒的细胞悬液、以及阴性对照液中细胞的侧向角散射(S)和保持完整细胞形态的细胞密度(C);(3)按照下述步骤计算病毒滴度:a)按公式:<img file="FDA0000616343910000011.GIF" wi="596" he="92" />计算细胞感染率P<sub>m,n</sub>,m为病毒稀释度编号,n为同一病毒稀释度感染细胞的重复组数编号;其中,所述S<sub>m,n</sub>为m号稀释度的病毒第n组感染细胞悬液的细胞侧向角散射的平均值;所述<img file="FDA0000616343910000012.GIF" wi="75" he="86" />为阴性对照液中细胞的侧向角散射的平均值;所述<img file="FDA0000616343910000013.GIF" wi="65" he="76" />为无稀释感染细胞悬液中细胞的侧向角散射的平均值;b)按公式:N<sub>m,n</sub>=C<sub>m,n</sub>×P<sub>m,n</sub>,计算步骤a)中细胞感染率满足20%&lt;P<sub>m,n</sub>&lt;80%的所述稀释感染细胞悬液的感染细胞密度N<sub>m,n</sub>;c)按公式:T<sub>m,n</sub>=N<sub>m,n</sub>/D<sub>m,n</sub>,计算步骤b)中各所述稀释感染细胞悬液的病毒滴度T<sub>m,n</sub>,取中位值即为病毒原液的病毒滴度;其中,所述D<sub>m,n</sub>为所述稀释感染细胞悬液的稀释度。
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