主权项 |
一种测定病毒滴度的方法,其特征在于,包括以下步骤:(1)取病毒原液以及若干个不同稀释度的病毒溶液,分别接种于待接病毒的细胞中,培养36‑60h,得到不同浓度病毒感染的细胞悬液;所述感染病毒的细胞悬液包括加入病毒原液的无稀释感染细胞悬液、加入各稀释度的病毒溶液的稀释感染细胞悬液;另取所述待接病毒的细胞悬液作为阴性对照液;(2)分别测量步骤1)中所述感染病毒的细胞悬液、以及阴性对照液中细胞的侧向角散射(S)和保持完整细胞形态的细胞密度(C);(3)按照下述步骤计算病毒滴度:a)按公式:<img file="FDA0000616343910000011.GIF" wi="596" he="92" />计算细胞感染率P<sub>m,n</sub>,m为病毒稀释度编号,n为同一病毒稀释度感染细胞的重复组数编号;其中,所述S<sub>m,n</sub>为m号稀释度的病毒第n组感染细胞悬液的细胞侧向角散射的平均值;所述<img file="FDA0000616343910000012.GIF" wi="75" he="86" />为阴性对照液中细胞的侧向角散射的平均值;所述<img file="FDA0000616343910000013.GIF" wi="65" he="76" />为无稀释感染细胞悬液中细胞的侧向角散射的平均值;b)按公式:N<sub>m,n</sub>=C<sub>m,n</sub>×P<sub>m,n</sub>,计算步骤a)中细胞感染率满足20%<P<sub>m,n</sub><80%的所述稀释感染细胞悬液的感染细胞密度N<sub>m,n</sub>;c)按公式:T<sub>m,n</sub>=N<sub>m,n</sub>/D<sub>m,n</sub>,计算步骤b)中各所述稀释感染细胞悬液的病毒滴度T<sub>m,n</sub>,取中位值即为病毒原液的病毒滴度;其中,所述D<sub>m,n</sub>为所述稀释感染细胞悬液的稀释度。 |