一种重组人p43蛋白生物学活性的检测方法

摘要

提供了一种测量重组人p43蛋白的生物学活性的方法，所述方法包括以下步骤：(1)使重组人p43蛋白诱导小鼠单核巨噬细胞Raw264.7，产生TNFα；(2)通过酶联免疫法测定步骤(1)生成的TNFα含量；(3)根据步骤(2)得到的TNFα含量得到重组人p43蛋白的生物学活性。本发明利用活性状态下的p43具有活化免疫系统的功能性反应以进行p43生物学活性测定，具有特异强、反应快速、重复性好，并能定量反应p43生物学活性的优点。

主权项

一种测量重组人p43蛋白的生物学活性的方法，所述方法包括以下步骤：(1)使重组人p43蛋白诱导小鼠单核巨噬细胞Raw264.7，产生TNFα；(2)通过酶联免疫法测定步骤(1)生成的TNFα含量；(3)根据步骤(2)得到的TNFα含量得到重组人p43蛋白的生物学活性，其中步骤(1)如下进行：细胞接种至96孔板约3小时后，以无血清DMEM培养基稀释p43样品、阴性及阳性对照：p43样品平行稀释至4000μg/ml、2000μg/ml、500μg/ml、125μg/ml、31.25μg/ml、15.625μg/ml、7.8125μg/ml、3.90625μg/ml八个浓度；阴性对照含2000μg/ml沸水浴变性p43样品，阳性对照含0.8μg/ml LPS，以无血清DMEM培养基做空白对照；将完全培养基和制备的各组样品按7∶1比例稀释混合，使得p43样品的终浓度为500μg/ml、250μg/ml、62.5μg/ml、15.625μg/ml、3.90625μg/ml、1.953125μg/ml、0.9765625μg/ml、0.48828125μg/ml，阴性对照的终浓度为250μg/ml，阳性对照的终浓度为0.1μg/ml；吸弃96孔板内原培养基，以每孔150μl体积加入稀释后各样品，每组设三个复孔，在5％CO₂、37℃培养箱内静置培养18小时。