RAPD-PCR试剂盒、扩增方法及其应用

摘要

本发明涉及分子生物学领域，特别涉及RAPD-PCR试剂盒、扩增方法及其应用。以成品卷烟烟丝总DNA为模板，该试剂盒通过二次RAPD-PCR获得的扩增产物电泳图谱清晰，为后续研究奠定了基础。

主权项

一种成品卷烟中烟丝总DNA的扩增方法，其特征在于，包括如下步骤：步骤1：获得成品卷烟烟丝总DNA；步骤2：取所述成品卷烟烟丝总DNA经第一RAPD‑PCR，获得第一扩增产物；步骤3：取所述第一扩增产物稀释后经第二RAPD‑PCR，获得第二扩增产物；所述第一RAPD‑PCR的反应体系为所述成品卷烟烟丝总DNA5ng～80ng、Mg²⁺ 1.50mM～3.00mM、dNTP 0.10mM～0.20mM、随机引物0.20μM～0.35μM、10×Buffer 2μL、Taq酶0.5U～1.25U；所述第二RAPD‑PCR的反应体系为所述第一扩增产物5ng～80ng、Mg²⁺1.50mM～3.00mM、dNTP 0.10mM～0.20mM、随机引物0.20μM～0.35μM、10×Buffer 2μL、Taq酶0.5U～1.25U；所述第一RAPD‑PCR或第二RAPD‑PCR的扩增程序包括：预变性94～95℃，5～7min；变性94～95℃，45～65s；退火37～40℃，30～40s；延伸72℃，90～100s；终延伸72℃，5～6min；30～40个循环；所述步骤2与所述步骤3之间还包括取所述第一扩增产物经第一电泳的步骤；所述第一电泳采用的琼脂糖凝胶的浓度为2～3％；步骤3中所述稀释的倍数为10～50倍；所述第二RAPD‑PCR后还包括取所述第二扩增产物经第二电泳的步骤；所述第二电泳采用的琼脂糖凝胶的浓度为2～3％。