纳米钻石表面修饰负载甲氨蝶呤的药物及其制备方法

摘要

本发明提供了一种纳米钻石表面修饰负载甲氨蝶呤的药物及其制备方法，以及该药物在制备抗肿瘤药物中的应用。本发明首先将纳米钻石表面用交联剂聚乙二醇二胺修饰，使其通过酰胺反应与缩水甘油偶联后再利用甲氨蝶呤结构中的羧基与羟基成酯制得目标药物ND-PEG-GLY-MTX。经MTT实验和流式细胞仪测试细胞周期和凋亡实验，表明ND-PEG-GLY-MTX能够诱导肿瘤细胞凋亡且疗效强于游离MTX，其可在制备抗肿瘤药物中应用。

主权项

一种纳米钻石表面修饰负载甲氨蝶呤的药物的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：(1)称取干燥的羧基化的纳米钻石，按每1mg羧基化的纳米钻石加入1‑1.5mL浓度为0.1M、pH5.8的MES缓冲溶液中，超声分散30min形成悬浊液，再按每1mg羧基化的纳米钻石中加入0.2mg EDC与0.3mg NHS，室温搅拌反应6h，计时结束后以15000rpm离心5min，弃去上清液，得到活化羧基的纳米钻石沉淀物；(2)把活化羧基的纳米钻石沉淀物分散到浓度为0.1M、pH8.4的硼酸缓冲溶液中，超声分散形成悬浊液，按每1mg活化羧基的纳米钻石加入0.5mg H₂N‑PEG‑NH₂，继续室温搅拌反应12h，待反应结束后，用浓度为0.1M、pH8.4的硼酸缓冲溶液以15000rpm离心5min洗涤3次，获得纳米钻石‑聚乙二醇二胺(ND‑PEG‑NH₂)沉淀物；(3)按每1mg ND‑PEG‑NH₂沉淀物溶于0.5mL无水乙醇中，超声分散30min，形成悬浊液，按每1mg ND‑PEG‑NH₂沉淀物逐滴加入体积分数为1％的缩水甘油的乙醇溶液0.5mL，再加入几滴三乙胺，维持反应体系pH在8‑9，室温避光搅拌反应24h，得到沉淀物，分别用无水乙醇和灭菌双蒸水以15000rpm离心5min洗涤3次，得到纳米钻石‑聚乙二醇二胺‑缩水甘油(ND‑PEG‑GLY)载体，放在真空干燥箱里避光保存；(4)按每1mg干燥的ND‑PEG‑GLY加入1mL灭菌双蒸水中，避光超声分散30min形成悬浊液，接着按ND‑PEG‑GLY与甲氨蝶呤(MTX)质量比5︰1‑3加入MTX，再按每1mgMTX中加入0.6mg EDC与0.35mg NHS在37℃水浴环境中避光反应24h，以15000rpm离心5min，用灭菌双蒸水洗涤3次，制得纳米钻石表面修饰负载甲氨蝶呤的药物ND‑PEG‑GLY‑MTX，真空干燥，冷藏。