主权项 |
一种L‑天冬氨酸制取工艺,其特征在于,其工艺步骤如下:(1)选育菌株:选用大肠杆菌作为天冬氨酸酶的来源,用肉汁培养基培养种子,接种与摇瓶培养基中,于32℃下振摇培养12h,逐级扩大培养至1000‑2000L规模后,用1mol/L的HCl调pH至5.0,保温42℃,2h后,冷却至室温,于转筒式高速离心机内离心,收集含有天冬氨酸酶的菌体;(2)细胞固定化:取大肠杆菌湿菌体15kg,悬浮于离心后的培养清液80L中或80L生理盐水,保温35℃再加入90L保温35℃的18%明胶溶液和1.0%的戊二醛溶液,充分搅匀后,放置冷却凝固,再放入0.25mol/L戊二醛溶液中浸泡,于5℃过夜后,再切成3–5mm3大小的小块,并将其浸泡在0.25mol/L戊二醛溶液中5℃过夜,再取出以蒸馏水洗涤,滤干,得含天冬氨酸酶的固定化大肠杆菌,将其装填到填充式生物反应器中,备用;(3)转化:取保温32℃的1mol/L延胡索酸铵含1mmol/LMgCl2,pH为8.5底物的溶液,以一定的空间速度连续流过生物反应器,控制最大转化率大于95%,得转化液;(4)修饰:取1g右旋糖苷溶于15ml蒸馏水,另取一定量NaIO4溶于10ml热水中,将两溶液混合,于4℃冰箱反应18h,室温下以蒸馏水透析4h后,再以5LpH7.4的0.1mol/L磷酸钠缓冲液透析,将透析后的液体加入到步骤(3)的转化液中,混合充分,得到混合液;(5)制取粗品:向步骤(4)得到的混合液渐加入1mol/L的HCl,调pH至2.8,在保持5℃下放置过夜结晶,滤取结晶,用水洗涤,滤干,于105℃干燥,得L‑天冬氨酸粗品;(6)结晶:将粗品用稀氨水重结晶,先以氨水溶解成pH为5.0,浓度15%的溶液再加入1%活性炭,加热70℃搅拌脱色2h后,趁热过滤去渣,取滤液冷却,保温5℃过夜结晶,过滤取结晶,85℃真空干燥,即得L‑天冬氨酸成品。 |