五味子中木脂素单体的提取分离制备方法

摘要

本发明公开了一种五味子中木脂素单体的提取分离制备方法：五味子药材粉末经CO₂超临界提取，得粗提物进行第一次高速逆流色谱分离，以体积比2-10:0-10:0-10:5的正己烷、乙酸乙酯、甲醇、水组成溶剂体系A，上相A为固定相A，下相A为流动相A，制得五味子醇甲、五味子醇乙和五味子酯乙；将分离后的固定相A回收，作为待测样品进行第二次高速逆流色谱分离，以体积比1-10:0-4:0-9:1的正己烷、乙酸乙酯、甲醇、水组成溶剂体系B，上相B为固定相B，下相B为流动相B，制得五味子甲素和五味子乙素。本发明采用超临界流体提取结合高速逆流色谱分离的方法，提取后无需复杂的样品处理即可直接用于后续单体的分离纯化，提取分离步骤简单高效。

主权项

一种五味子中木脂素单体的提取分离制备方法，其特征在于所述方法包括以下步骤：(1)称取五味子果实粉碎后过10～65目筛，得五味子药材粉末，进行CO₂超临界提取，提取温度35～60℃，提取压力14～30MPa，提取时间0.5～6h，制得五味子粗提物；(2)步骤(1)所得五味子粗提物进行第一次高速逆流色谱分离，首先以体积比为5～8:2～5:4～5:5的正己烷、乙酸乙酯、甲醇、水组成高速逆流溶剂体系A，混合充分后静置，按上下两相分开，取上相A为固定相A，下相A为流动相A，取五味子粗提物，用上相A、下相A体积比1:1的混合溶剂溶解，作为供试品溶液，将固定相A充满高速逆流色谱仪的多层线圈分离柱，设定高速逆流色谱仪，在500～1000r/min转速下，以0.1～10ml/min的流速注入流动相A，以波长180～400nm的紫外检测器检测，当明显有流动相流出时，取供试品溶液进样，根据紫外检测器光谱图，对分离的各个色谱峰的对应流出液进行收集，经HPLC检测，合并相同成分的流出液，浓缩、干燥，分别制得五味子醇甲、五味子醇乙和五味子酯乙；(3)将步骤(2)第一次高速逆流色谱分离后的固定相A取出回收，除去溶剂、干燥后，作为待测样品进行第二次高速逆流色谱分离，以体积比为2～4:1～2:2～4:1的正己烷、乙酸乙酯、甲醇、水组成高速逆流溶剂体系B，混合充分后静置，按上下两相分开，取上相B为固定相B，下相B为流动相B，将待测样品用上相B、下相B体积比1：1的混合溶剂溶解，作为待测样品溶液，将固定相B充满高速逆流色谱仪的多层线圈分离柱，设定高速逆流色谱仪，在500～1000r/min转速下，以0.1～10ml/min的流速注入流动相B，以波长180～400nm的紫外检测器检测，当明显有流动相流出时，取待测样品溶液进样，根据紫外检测器光谱图，对分离的各个色谱峰的对应流出液进行收集，经HPLC检测，合并相同成分的流出液，浓缩、干燥，分别制得五味子甲素和五味子乙素。