一种抑制山核桃外植体褐化的方法

摘要

本发明涉及林木种苗繁殖技术，具体是涉及一种抑制山核桃外植体褐化的方法。于春季选取山核桃带腋芽茎段作为外植体，对外植体进行消毒处理，再将外植体接种于添加了儿茶素和抗褐化剂的培养基中，接种初期先将组培瓶置于低温黑暗环境下培养，然后转入常规培养环境。本发明抑制山核桃外植体褐化的方法，能够显著降低山核桃外植体的褐变率以及提高其诱导率，操作简便，抑制褐化效果较好，为山核桃组织培养以及山核桃无性繁殖提供技术依托。

主权项

一种抑制山核桃外植体褐化的方法，其特征在于，步骤如下：①、消毒处理以春季山核桃优树当年生带腋芽茎段作为外植体，用流水冲洗1～2h后，以多菌灵浸泡30min，再置于超净工作台，以75％酒精(体积百分比)浸泡90s，无菌水清洗3次，再用0.1％的升汞(氯化汞)浸泡15min，无菌水清洗3次；②、培养基配制以1L pH调至5.8～6.0的培养基计，培养基中含有：儿茶素3g；附加成分为：6‑苄基氨基嘌呤(6‑Benzylaminopurine)5mg、6‑呋喃甲基腺嘌呤(Kinetin，激动素)1mg、2，4‑二氯苯氧乙酸(2，4‑Dichlorophenyloxy acetic acid)0.1mg、a‑萘乙酸(A‑naphthlcetic acid)0.05mg、琼脂7.5g、蔗糖30g；硝酸银0.05g；余量为WPM基本培养基；③、接种将消毒好的带腋芽茎段修剪好接入配制好的培养基中，先置于10℃、黑暗条件下培养48h，随后再转至环境温度为25℃，光照时间为12h·d^‑1，光照强度为1200lx，相对湿度为50～70％的常规培养环境中培养30d；或者①、消毒处理以春季山核桃优树当年生带腋芽茎段作为外植体，用流水冲洗1～2h后，以多菌灵浸泡30min，再置于超净工作台，以75％酒精(体积百分比)浸泡90s，无菌水清洗3次，再用0.1％的升汞(氯化汞)浸泡15min，无菌水清洗3次；②、培养基配制以1L pH调至5.8～6.0的培养基计，培养基中含有：儿茶素2g；附加成分为：6‑苄基氨基嘌呤(6‑Benzylaminopurine)5mg、6‑呋喃甲基腺嘌呤(Kinetin，激动素)1mg、2，4‑二氯苯氧乙酸(2，4‑Dichlorophenyloxy acetic acid)0.1mg、a‑萘乙酸(A‑naphthlcetic acid)0.05mg、琼脂7.5g、蔗糖30g；硝酸银0.05g；余量为WPM基本培养基；③、接种将消毒好的带腋芽茎段修剪好接入配制好的培养基中，先置于10℃、黑暗条件下培养48h，随后再转至环境温度为25℃，光照时间为12h·d^‑1，光照强度为1200lx，相对湿度为50～70％的常规培养环境中培养30d；或者①、消毒处理以春季山核桃优树当年生带腋芽茎段作为外植体，用流水冲洗1～2h后，以多菌灵浸泡30min，再置于超净工作台，以75％酒精 (体积百分比)浸泡90s，无菌水清洗3次，再用0.1％的升汞(氯化汞)浸泡15min，无菌水清洗3次；②、培养基配制以1L pH调至5.8～6.0的培养基计，培养基中含有：儿茶素4g；附加成分为：6‑苄基氨基嘌呤(6‑Benzylaminopurine)5mg、6‑呋喃甲基腺嘌呤(Kinetin，激动素)1mg、2，4‑二氯苯氧乙酸(2，4‑Dichlorophenyloxy acetic acid)0.1mg、a‑萘乙酸(A‑naphthlcetic acid)0.05mg、琼脂7.5g、蔗糖30g；硝酸银0.05g；余量为WPM基本培养基；③、接种将消毒好的带腋芽茎段修剪好接入配制好的培养基中，先置于10℃、黑暗条件下培养48h，随后再转至环境温度为25℃，光照时间为12h·d^‑1，光照强度为1200lx，相对湿度为50～70％的常规培养环境中培养30d；或者①、消毒处理以春季山核桃优树当年生带腋芽茎段作为外植体，用流水冲洗1～2h后，以多菌灵浸泡30min，再置于超净工作台，以75％酒精(体积百分比)浸泡90s，无菌水清洗3次，再用0.1％的升汞(氯化汞)浸泡15min，无菌水清洗3次；②、培养基配制以1L pH调至5.8～6.0的培养基计，培养基中含有：儿茶素3g；附加成分为：6‑苄基氨基嘌呤(6‑Benzylaminopurine)4mg、6‑呋喃甲基腺嘌呤(Kinetin，激动素)2.0mg、2，4‑二氯苯氧乙酸(2，4‑Dichlorophenyloxy acetic acid)0.05mg、a‑萘乙酸(A‑naphthlcetic acid)0.04mg、琼脂8g、蔗糖25g；硝酸银0.05g；余量为WPM基本培养基；③、接种将消毒好的带腋芽茎段修剪好接入配制好的培养基中，先置于10℃、黑暗条件下培养48h，随后再转至环境温度为25℃，光照时间为12h·d^‑1，光照强度为1200lx，相对湿度为50～70％的常规培养环境中培养30d；或者①、消毒处理以春季山核桃优树当年生带腋芽茎段作为外植体，用流水冲洗1～2h后，以多菌灵浸泡30min，再置于超净工作台，以75％酒精(体积百分比)浸泡90s，无菌水清洗3次，再用0.1％的升汞(氯化汞)浸泡15min，无菌水清洗3次；②、培养基配制以1LpH调至5.8～6.0的培养基计，培养基中含有：儿茶素3g；附加成分为：6‑苄基氨基嘌呤(6‑Benzylaminopurine)6mg、6‑呋喃甲基腺嘌呤(Kinetin，激动素)0.5mg、2，4‑二氯苯氧乙酸(2，4‑Dichlorophenyloxy acetic acid)0.2mg、a‑萘乙酸(A‑naphthlcetic acid)0.06mg、琼脂7g、蔗糖20g；硝酸银0.05g；余量为WPM基本培养基；③、接种将消毒好的带腋芽茎段修剪好接入配制好的培养基中，先置于10℃、黑暗条件下培养48h，随后再转至环境温度为25℃，光照时间为12h·d^‑1，光照强度为1200lx，相对湿度为50～70％的常规培养环境中培养30d。