一种用硅胶柱层析法分离纯化甘油磷酸胆碱的方法

摘要

本发明公开了一种用硅胶层析柱法分离纯化甘油磷酸胆碱(L-α-GPC)的方法，属于脂质开发应用技术领域。包括如下步骤：酶解反应液为原料，先用离子交换树脂除去Ca²⁺和Cl^-，然后将水相转化成醇相，通过硅胶层析柱将L-α-GPC和GPE、LPC及其它副产物分开，活性炭脱色，真空浓缩除水，得到无色、透明的产品；醇解反应液为原料，直接过硅胶柱分离，阳离子交换树脂除Na⁺，活性炭脱色，真空浓缩除水，得到产品。产品的指标检测：化学纯度99.6％，光学纯度ee：99％，mp142-143℃，(C＝2.6，H₂O含量16％，pH＝5.8)。本发明为分离纯化L-α-GPC提供了一种新的思路和方法，也增加了硅胶柱层析分离纯化方法在脂质科学中的应用。

主权项

一种硅胶柱层析法分离纯化甘油磷脂酰胆碱(L‑α‑GPC)的方法，其特征在于，包括如下工艺步骤：(1)纯化酶解反应液：将粉末磷脂加到蒸馏水中，形成乳化态磷脂水溶液，均质，添加CaCl₂和磷脂酶A₁，水浴加热，反应一段时间，然后离心、过滤，得到澄清的酶反应液；阳离子交换树脂去除Ca²⁺，流速0.5～4mL/min，柱下收集液中不能检测到Ca²⁺，吸附饱和后再生，再生次数大于10次；阴离子交换树脂去除Cl^‑，流速0.5～4mL/min，柱下收集液中不能检测到Cl^‑，吸附饱和后再生，再生次数大于10次，45～75℃，旋转蒸发去水，溶于低碳链醇，转化成醇相；称量一定量的硅胶，溶于醇，搅拌匀浆、过夜、装柱、压实、上样，0％～100％低碳链醇水溶液(v∶v，醇∶水)进行洗脱，流速0.5～4mL/min，每10～60mL馏分进行收集，HPLC‑ELSD检测每份馏分，合并L‑α‑GPC的馏分；在50～90℃，活性炭脱色，得到澄清的水溶液，45～75℃，减压下蒸干溶剂，得到产品，低碳链醇进行回收，重复使用；硅胶回收，烘箱中，100～150℃、时间2～8h，硅胶可再生次数大于10；(2)纯化醇解反应液：将粉末磷脂溶于甲醇中，室温、添加甲醇钠、磁力搅拌、反应一段时间，然后低温结晶、分液、抽滤，得到L‑α‑GPC醇溶液；称量硅胶，溶于甲醇，搅拌匀浆、过夜、装柱、压实、上样，用0％～100％低碳链醇水溶液(v∶v，醇∶水)进行洗脱，流速0.5～4mL/min，每10～60mL馏分进行收集，HPLC‑ELSD检测每份馏分，合并L‑α‑GPC的馏分；过阳离子交换树脂柱去除Na⁺，柱下收集液中不能检测到Na⁺，流速0.5～4mL/min，吸附饱和后再生，再生次数大于10次；50～90℃，活性炭脱色，得到澄清的水溶液，45～75℃，减压下蒸干溶剂，得到产品，低碳链醇进行回收，重复使用；硅胶回收，烘箱中，100～150℃、时间2～8h，硅胶可再生次数大于10。