冬瓜生腌过程中的优势菌群及其扩增引物

摘要

本发明公开了一种冬瓜生腌过程中的优势菌群及其扩增引物，在冬瓜生腌的初期，腌制体系中的优势菌为乳球菌属、魏斯氏菌属和肠杆菌属；在冬瓜生腌的中期，优势菌属转变为片球菌属；在冬瓜生腌的后期，优势菌为枝芽孢杆菌属和魏斯氏菌属，其中乳球菌属的乳酸乳球菌的上下游引物如SEQ ID NO.1和NO.2所示，片球菌属的戊糖片球菌的上下游引物如SEQ ID NO.3和NO.4所示，枝芽孢杆菌属的Virgibacillus byunsanensis上下游引物如SEQ ID NO.5和NO.6所示，优点是揭示冬瓜发酵过程中的优势微生物的动态变化情况，从而为工艺改进及品质控制提供理论依据。

主权项

一种冬瓜生腌过程中的优势菌群的检测方法，其特征在于：在冬瓜生腌的初期，腌制体系中的优势菌为乳球菌属、魏斯氏菌属和肠杆菌属；在冬瓜生腌的中期，优势菌属转变为片球菌属；在冬瓜生腌的后期，优势菌为枝芽孢杆菌属和魏斯氏菌属，所述的乳球菌属的优势菌为乳酸乳球菌，其荧光定量PCR检测的上游引物为5′‑CTGAAGGTTGGTACTTGTACCGAC‑3′，下游引物为5′‑CGGGATCATCTTTGAGTGATGC‑3′；荧光定量PCR反应条件为预变性95℃保持2分钟，然后30‑40个循环：95℃15s，58℃20s，72℃20s；PCR反应体系为SYBR Green 10μl，乳酸乳球菌上下游引物溶液各0.5μl：模板1μl，H₂O 8μl，其中乳酸乳球菌上下游引物溶液的溶剂是灭菌双蒸水，引物浓度均为10μmol；所述的乳酸乳球菌的标准曲线为：y＝‑3.3346x+34.157，R²＝0.9991，其中拷贝数的对数为横坐标x，以仪器获取的阈值为纵坐标y；所述片球菌属的优势菌为戊糖片球菌，其荧光定量PCR检测的上游引物为5′‑CCAGAAGTAGGGGATAACACCTG‑3′，下游引物为5′‑GGGTAAACAGTTACTCTTACCCACG‑3′；荧光定量PCR反应条件为预变性95℃保持2分钟，然后30‑40个循环：95℃15s，60℃20s，72℃20s；PCR反应体系为SYBR Green 10μl，戊糖片球菌上下游引物溶液各0.5μl，模板DNA 1μl，H₂O 8μl，其中戊糖片球菌上下游引物溶液的溶剂是灭菌双蒸水，引物浓度均为10μmol；所述的戊糖片球菌的标准曲线为y＝‑3.2818x+35.446，R²＝0.9931；所述枝芽孢杆菌属的优势菌为Virgibacillus byunsanensis，其荧光定量PCR的上游引物为5′‑CAGGCAAACACCCTTCGG‑3′，下游引物为5′‑CCGCCCTATTTGAACGGTAC‑3′；荧光定量PCR反应条件为预变性95℃保持2分钟，然后30‑40个循环：95℃15s，60℃20s，72℃20s；PCR反应体系为SYBR Green 10μl，Virgibacillus byunsanensis上下游引物溶液各0.5μl，模板DNA 1μl，H₂O 8μl，其中Virgibacillus byunsanensis上下游引物溶液的溶剂是灭菌双蒸水，引物浓度均为10μmol；所述的Virgibacillus byunsanensis的标准曲线为y＝‑3.4255x+39.073，R²＝0.9719。