一种固定化复合酶及利用该酶处理蒜氨酸废液的方法

摘要

本发明涉及生物化学领域，涉及了一种固定化复合酶及利用该酶提取蒜氨酸废液中大蒜多糖的方法，该方法主要将破壁酶：果胶酶（酶活：10万u/g）和除蛋白酶：菠萝蛋白酶(酶活：10万u/g）固定在环氧基大孔树脂中，破壁酶能够水解纤维素使细胞壁破裂，蛋白多糖被释放出来，而除蛋白酶能够酶解与多糖结合的蛋白质。采用该固定化复合酶提取蒜氨酸废液中的大蒜多糖，经过滤、0.5μm~5μm超滤膜分离、浓缩、喷雾干燥，制备大蒜多糖产品，采用该方法可以提高多糖的得率，降低多糖中蛋白质的含量，提高了多糖的纯度。

主权项

固定化复合酶提取蒜氨酸废液中大蒜多糖的方法，其特征在于：具体步骤如下：取蒜氨酸废液，用浓度为1mol/L的氢氧化钠和浓度为1mol/L的盐酸溶液调节至pH值为4.5‑6.5，取5‑20mg制备的固定化复合酶加入到200‑800mL的pH值为4.5‑6.5蒜氨酸废液中，置于恒温振荡器中酶解，酶解温度为35‑55℃，转速为200‑400rpm，pH值为4.5‑6.5，时间为60‑100min；酶解后酶解液经过滤，0.5μm‑5μm的超滤膜分离，浓缩，干燥得到大蒜多糖产品；蒜氨酸废液采用如下方法获得：微波处理使大蒜片中的蒜氨酸酶失活，然后调节匀浆机8000r/min将大蒜片制成蒜浆，常温下循环超声波提取得到大蒜粗提取液，过滤，滤液流经离子交换树脂，25w/w％氨水洗脱树脂吸附的蒜氨酸得到蒜氨酸溶液，残留液为蒜氨酸废液；其中所采用的离子交换树脂为丙烯酸型阳离子交换树脂；固定化复合酶为固定在环氧基大孔树脂载体中的果胶酶和菠萝蛋白酶，所述果胶酶与菠萝蛋白酶的用量比例按酶活计为1：3‑3：1；所述环氧基大孔树脂载体为：采用悬浮聚合法以甲基丙烯酸缩水甘油酯为功能单体，二甲基丙烯酸乙二醇酯为交联剂，合成环氧基大孔树脂载体，选取80‑110目的环氧基大孔树脂载体作为固定化复合酶用环氧基大孔树脂载体；固定化复合酶制备方法为：将选取1.0g的环氧基大孔树脂载体溶胀；将果胶酶及菠萝蛋白酶分别用pH为4.5‑6.5缓冲液配置成15mg/ml的酶溶液，之后分别吸取5.0‑15.0ml果胶酶及菠萝蛋白酶溶液并转移到锥形瓶中，然后再用移液管吸取40.0‑80.0ml的pH为4.5‑6.5的缓冲溶液置入锥形瓶中，轻微摇动使体系混合均匀，把溶胀的环氧基大孔树脂载体加入到锥形瓶中，用保鲜膜将锥形瓶盖好，然后放入35℃恒温振荡器中，在200rpm转速条件下，振荡6h，使其充分固定即得；其中所采用的缓冲溶液是浓度为0.05mol/L的醋酸溶液和浓度为0.05mol/L醋酸钠溶液，或浓度为0.05mol/L柠檬酸溶液和浓度为0.05mol/L柠檬酸钠溶液。