克罗诺杆菌检测方法、引物对、目标、内标探针和试剂盒

摘要

本发明公开了阪崎克罗诺杆菌（Cronobacter sakazakii）的检测方法、引物对、目标探针、内标探针和试剂盒。检测方法：1）PCR反应体系中，加入待检样品的DNA、引物对（序列如SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.2）、目标探针（序列如SEQ ID NO.3）、内标探针（序列如SEQ ID NO.4）和内标模板（序列如SEQ ID NO.5），进行荧光定量PCR扩增；2）收集PCR反应过程中荧光信号。该检测方法检测时间短，成本低，更加具有实用性，检测结果特异，且能够很好的避免假阴性结果的发生，结果判定简单。

主权项

一种奶粉中阪崎克罗诺杆菌(Cronobacter sakazakii)的检测方法，其特征在于：所述的检测方法包括以下步骤：(1)所述的奶粉在检测前进行预处理；所述的预处理的方法为：将所述的奶粉预增菌，再提取DNA，即可；其中，所述的预增菌的方法为：将所述的奶粉添加到缓冲蛋白胨水增菌培养基中，在36‑38℃中增菌16‑24h，即可；所述的提取DNA的方法为：用煮沸法提取DNA，所述的煮沸法为在99‑101℃条件下水浴10‑20min，再在12000rpm速度下离心5min，取上清液，即可；在PCR反应体系中，加入从奶粉中提取的DNA、检测阪崎克罗诺杆菌的引物对、目标探针、内标探针和内标模板，进行荧光定量PCR扩增；所述的检测阪崎克罗诺杆菌的引物对中，一条引物的序列如SEQ ID NO.1所示，另一条引物的序列如SEQ ID NO.2所示，所述的目标探针的序列如SEQ ID NO.3所示，所述的内标探针的序列如SEQ ID NO.4所示，所述的内标模板的序列如SEQ ID NO.5所示；所述的目标探针的5′端标记有荧光基团FAM，所述的目标探针的3′端标记有荧光基团BHQ1；所述的内标探针的5′端标记有荧光基团HEX，所述的内标探针的3′端标记有荧光基团BHQ1；(2)利用荧光定量PCR仪实时跟踪收集PCR反应过程中FAM和HEX的荧光信号，即可。