| 发明名称 | 一种基质表达T.fusca角质酶的方法 | ||
| 摘要 | 本发明涉及一种基质表达T.fusca角质酶的方法，属于生物工程技术和酶工程领域。本发明由本研究室前期构建的Tfu_0883/pET-20b(+)为模板，PCR扩增得到角质酶成熟蛋白基因，连接表达载体，转化E.coli宿主菌，实现了角质酶的基质表达。摇瓶发酵中，经过诱导重组角质酶在培养基中的酶活达到204.8U/mL，为总酶活的95.3％。进一步在3L发酵罐中放大培养，最终酶活为1063U/mL，是摇瓶发酵的5.2倍，生产强度为44.2U/mL/h，为国内外报道的最高水平。 | ||
| 申请公布号 | CN102899298B | 申请公布日期 | 2015.04.15 |
| 申请号 | CN201210241426.7 | 申请日期 | 2012.07.05 |
| 申请人 | 江南大学 | 发明人 | 吴敬;宿玲恰;陈晟;陈坚 |
| 分类号 | C12N9/16(2006.01)I;C12N15/70(2006.01)I;C12R1/19(2006.01)N | 主分类号 | C12N9/16(2006.01)I |
| 代理机构 | 北京爱普纳杰专利代理事务所(特殊普通合伙) 11419 | 代理人 | 张勇 |
| 主权项 | 一种基质表达T.fusca角质酶的方法，其特征在于，将NCBI编号为AAZ54921的T.fusca角质酶成熟蛋白基因在大肠杆菌中表达，发酵培养并收集发酵上清液；具体方法为：1)将T.fusca角质酶成熟蛋白基因克隆到pET‑20b(+)，构建无信号肽角质酶的重组质粒Tfu_0883/pET‑20b(+)NS；2)将重组质粒Tfu_0883/pET‑20b(+)NS导入宿主大肠杆菌；3)步骤2)构建的无信号肽角质酶重组菌进行发酵，收集发酵上清液。 | ||
| 地址 | 214122 江苏省无锡市滨湖区蠡湖大道1800号 | ||