一种治疗哮喘的中药制剂的检测方法

摘要

本发明涉及一种治疗哮喘的中药制剂百花定喘丸的质量控制方法，步骤是：(1)性状及鉴别；(2)薄层色谱法鉴别陈皮；(3)薄层色谱法鉴别牡丹皮；(4)薄层色谱法鉴别黄芩；(5)薄层色谱法鉴别苦杏仁；(6)高效液相法测定麻黄。本发明的检测方法在《卫生部药品标准》中药成方制剂第一册原标准的基础上，增加了对照药材和对照品的薄层鉴别检验方法，制定了高效液相色谱法进行含量测定的方法，修订后的质量标准控制方法，提高了百花定喘丸质量标准的可控性，进一步确保产品内在质量和疗效，对促进产品销售、增加产品的市场竞争力、保证患者用药安全意义重大。

主权项

一种治疗哮喘的中药制剂百花定喘丸的检测方法，其方法的步骤是：(1)性状鉴别：性状描述为：百花定喘丸为棕褐色至黑褐色的大蜜丸；味甜、微苦；置显微镜下观察：款冬花：花粉粒球形，直径约至32μm，外壁具刺，较尖；桔梗：联结乳管直径14～25μm，含黄色颗粒状物；五味子：种皮表皮石细胞淡黄棕色，表面观呈类多角形，壁较厚，孔沟细密，胞腔含暗棕色物；薄荷：腺鳞头部8细胞，扁球形，直径约至90μm，柄单细胞；麻黄：气孔特异，保卫细胞侧面观成哑铃形；石膏：不规则片状结晶无色，有平直纹理；(2)薄层色谱法鉴别陈皮：采用薄层色谱法，以橙皮苷为对照品，鉴别百花定喘丸处方中的陈皮；①供试品溶液的制备：取百花定喘丸9g，剪碎，加甲醇25ml，加热回流30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加水10ml使溶解，用乙酸乙酯振摇提取2次，每次20ml，合并乙酸乙酯提取液，蒸干，残渣加甲醇2ml使溶解，作为供试品溶液；②对照品溶液的制备：取橙皮苷对照品，加甲醇制成饱和溶液，作为对照品溶液；③阴性样品溶液的制备：按处方配比，取除陈皮以外的其他药味，按照《中华人民共和国卫生部药品标准中药成方制剂第一册》原标准上【制法】项下的工艺制备制成丸剂，再按上述供试品溶液制备方法制得阴性样品溶液；④薄层检测：照《中国药典》2005年版一部附录VIB薄层色谱法试验，吸取上述三种溶液各4～6μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷‑甲醇‑丁酮‑冰醋酸＝13∶4∶1∶1为展开剂，展开，取出，晾干，喷以三氯化铝试液；⑤结果分析：不同生产批次百花定喘丸供试品的检测结果；置紫外光灯365nm下检视，供试品色谱中，在与橙皮苷对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点，阴性样品亦无干扰；表明供试样品含有陈皮成分；(3)薄层色谱法鉴别牡丹皮：采用薄层色谱法，以丹皮酚为对照品，鉴别百花定喘丸处方中牡丹皮；①供试品溶液的制备：取百花定喘丸2丸，剪碎，加硅藻土8g，研匀，加乙醚40ml，加热回流60分钟，滤过，残渣备用；滤液挥干，残渣加丙酮1ml使溶解，作为供试品溶液；②对照品溶液的制备：取丹皮酚对照品，加丙酮制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液；③阴性样品溶液的制备：按处方配比，取除牡丹皮以外的其他药味，按照《中华人民共和国卫生部药品标准中药成方制剂第一册》原标准上【制法】项下的工艺制备制成丸剂，再按上述供试品溶液制备方法制得阴性样品溶液；④薄层检测：照《中国药典》2005年版一部附录VIB薄层色谱法试验，吸取上述三 种溶液各2～6μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以环己烷‑乙酸乙酯＝3∶1为展开剂，展开，取出，晾干，喷以盐酸酸性5％三氯化铁乙醇溶液，加热至斑点显色清晰；⑤结果分析：不同生产批次百花定喘丸供试品的检测结果；供试品色谱中，在与丹皮酚对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点，阴性样品无干扰；表明供试样品含有牡丹皮成分；(4)薄层色谱法鉴别黄芩：采用薄层色谱法，以黄芩苷为对照品，鉴别百花定喘丸处方中黄芩；①供试品溶液的制备：取上述牡丹皮鉴别中供试品溶液的制备项下的滤渣，加甲醇30ml，加热回流30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇3ml使溶解，取上清液作为供试品溶液；②对照品溶液的制备：取黄芩苷对照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液；③阴性样品溶液的制备：按处方配比，取除黄芩以外的其他药味，按照《中华人民共和国卫生部药品标准中药成方制剂第一册》原标准上【制法】项下的工艺制备制成丸剂，再按上述供试品溶液制备方法制得阴性样品溶液；④薄层检测：照《中国药典》2005年版一部附录VIB薄层色谱法试验，吸取上述三种溶液各4μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以乙酸乙酯‑丁酮‑甲酸‑水＝5∶3∶1∶1为展开剂，展开，取出，晾干，喷以1％三氯化铁乙醇溶液；⑤结果分析：不同生产批次百花定喘丸供试品的检测结果；供试品色谱中，在与黄芩苷对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点，阴性样品无干扰；表明供试样品含有黄芩成分；(5)薄层色谱法鉴别苦杏仁：采用薄层色谱法，以苦杏仁为对照药材，鉴别百花定喘丸处方中苦杏仁；①供试品溶液的制备：取上述黄芩鉴别项下的供试品溶液； ②对照药材溶液的制备：取苦杏仁对照药材1g，加甲醇15ml，加热回流30分钟，放冷，滤过，滤液作为对照药材溶液；③阴性样品溶液的制备：按处方配比，取除苦杏仁以外的其他药味，按照《中华人民共和国卫生部药品标准中药成方制剂第一册》原标准上【制法】项下的工艺制备制成丸剂，再按上述供试品溶液制备方法制得阴性样品溶液；④薄层检测：照《中国药典》2005年版一部附录VIB薄层色谱法试验，吸取上述三种溶液各4～6μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以甲苯‑甲酸乙酯‑甲醇‑甲酸‑水＝12∶4∶0.8∶0.2∶2的上层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以1％香草醛乙醇与3％高氯酸＝1∶1混合溶液，加热至斑点显色清晰；⑤结果分析：不同生产批次百花定喘丸供试品的检测结果；供试品色谱中，在与苦杏仁对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点，阴性样品无干扰；表明供试样品含有 苦杏仁成分；(6)高效液相法测定麻黄：采用高效液相法测定处方百花定喘丸中的麻黄，以盐酸麻黄碱为对照品；①液相色谱条件的设定：参照《中国药典》2005年版一部中“通宣理肺丸”含量测定方法制定；用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；流动相：乙睛‑0.1％磷酸溶液＝30∶870；检测波长为210nm，柱温：40℃；流速：1ml/分钟；理论板数按盐酸麻黄碱峰计算不低于5000；采用上述色谱条件，对盐酸麻黄碱与盐酸伪麻黄碱进行了分析，结果，采用上述色谱条件，两者能够达到基线分离；②标准品溶液的制备：取盐酸麻黄碱对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1ml含60μg的溶液，即得；③供试品溶液的制备：取本品适量，剪碎，取约2g，精密称定，加硅藻土2g，研匀，置索氏提取器中，加浓氨试液3ml，用乙醇10ml分次洗涤乳钵等，一并转移至置索氏提取器中，再加乙醚适量，加热回流至提取液无色，提取液减压蒸至近干，残留物加入盐酸甲醇溶液1→1000使溶解，转移至10ml量瓶中，并稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得；本方法是参照《中国药典》2005年版一部中“通宣理肺丸”含量测定方法制定；供试品溶液制备中，根据盐酸麻黄碱成分的结构特性，采用索氏提取方式，浓氨溶液碱化，乙醚作提取溶剂，是以提取液无色作为提取终点；鉴于“通宣理肺丸”供试品溶液制备中转移不完全的现象，将使用的乙醇作为清洗乳钵等仪器的洗液，并入索氏提取器中；另鉴于提取液中含有少量乙醇等不易挥发的溶剂，鉴于麻黄碱为仲胺类成分，具易挥发的特点，采用低温减压蒸至近干的方式，使供试品溶液制备方法趋于合理；④阴性样品溶液的制备：按处方去除麻黄的各味药材，按《中华人民共和国卫生部药品标准中药成方制剂第一册》原标准上【制法】制得样品，再按上述供试品溶液制备方法，制得阴性样品溶液；⑤测定：分别精密吸取对照品溶液、供试品溶液、阴性样品溶液以及使用溶剂各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得；⑥结果分析：由保留时间可以确定供试样品中含有盐酸麻黄碱；参照《中国药典》2005年版一部麻黄项下含量限度计算，每g样品含盐酸麻黄碱应为0.29mg；根据色谱图可推算得到百花定喘丸中盐酸麻黄碱的含量，该含量与国家药典进行比较，即可判断供试样品的麻黄含量是否合格，进而判断不同厂家、不同批次的百花定喘丸的品质；本实验样品百花定喘丸处方中，麻黄占处方总量的6.7％，制剂中按每100g生粉加炼蜜130g计算，每g样品约含麻黄生粉29.13mg；鉴于百花定喘丸为生粉入药，按照国家药典委员会要求，生粉入药按80％转移率计算含量限度制定为每g含麻黄以盐酸麻黄碱，其分子式为C₁₀H₁₅NO.HCl计，不得少于0.20mg；按每丸计算，限度订为每丸含麻黄以盐酸麻黄碱，其分子式为C₁₀H₁₅NO.HCl计，不得少于1.8mg；所述百花定喘丸由款冬花44g、陈皮88g、麦冬88g、天花粉88g、北沙参44g、石膏44g、五味子44g、桔梗88g、牡丹皮88g、薄荷88g、天冬88g、苦杏仁88g、前胡88g、黄芩88g、百合88g、麻黄88g、紫菀88g十七味中药组成，其制备方法为将以上十七味，粉碎成细粉，过筛，混匀，每100g粉末加炼蜜120～130g制成大蜜丸即得。