一种从茄子皮中分离制备高纯度酰化的飞燕草素衍生物的方法

摘要

本发明涉及一种从茄子皮中分离制备3-[4-p-香豆酰-L-鼠李糖基-(1→2)-D-吡喃葡萄糖苷]-5-D-吡喃葡糖苷飞燕草素的方法，所述方法以茄子为原料，通过将其削皮，浸提浓缩、除杂、大孔树脂纯化、凝胶纯化、结合半制备色谱的步骤，得到3-[4-p-香豆酰-L-鼠李糖基-(1→2)-D-吡喃葡萄糖苷]-5-D-吡喃葡糖苷飞燕草素；所述方法操作简单，能有效从茄子皮中分离得到高纯度的花色苷单体，得到的3-[4-p-香豆酰-L-鼠李糖基-(1→2)-D-吡喃葡萄糖苷]-5-D-吡喃葡糖苷飞燕草素的纯度为99.79％以上，并且可实现大规模制备。

主权项

一种从茄子皮中分离制备3‑[4‑p‑香豆酰‑L‑鼠李糖基‑(1→2)‑D‑吡喃葡萄糖苷]‑5‑D‑吡喃葡糖苷飞燕草素的方法，包括以下步骤：(1)原料预处理：将新鲜茄子进行洗净、剥皮，并将茄子皮切碎；(2)茄子皮花色苷粗提浓缩液：将得到的茄子皮，按照料液比1g︰2mL的比例加入体积比为0.01％的盐酸的甲醇溶液中，常温下，浸提，过滤，反复三次，然后合并滤液，在40‑45℃下真空旋转蒸发除去甲醇得到花色苷粗提液，按所述粗提液︰乙酸乙酯的体积比为1︰2的比例加入乙酸乙酯萃取，静置分层，萃取三次，收集合并水相，在40‑50℃下真空旋转充分蒸发除去乙酸乙酯，得到花色苷浸膏；将浸膏用少量的体积比为0.01％的盐酸的水溶液溶解，得到花色苷上样液；(3)大孔树脂吸附：将大孔吸附树脂装入层析柱中，用体积比为0.01％的盐酸的水溶液冲洗；将所述花色苷上样液以0.5BV/h的流速注入大孔树脂柱中，先用含体积比为0.01％的盐酸的去离子水以1BV/h冲洗树脂，再用体积比为0.01％的盐酸的甲醇溶液以1BV/h的流速将花色苷成分从树脂上解析下来，将得到的解析液在40‑45℃下真空旋转蒸发除去甲醇，得到花色苷粗品；其中，所述大孔吸附树脂为XAD‑7HP，比表面积为500m²/g，平均孔径为平均粒径为560μm，偶极距为1.8，均一系数D90/D40为1.7；其中，所述层析柱的直径为50mm，长度为600mm；(4)凝胶纯化：将从大孔树脂纯化得到的花色苷粗品注入凝胶柱，用体积比为50％的甲醇水洗脱，按照每15分钟接取一次，收集洗脱液，将收集到的洗脱液在40‑45℃下真空旋转蒸发除去甲醇，得到初步纯化的花色苷提取物；其中，所述凝胶柱为Sephadex LH‑20，所述凝胶柱直径为15mm，长度为300mm；(5)单体制备：利用半制备色谱分离所述花色苷提取物，流动相分别为A相：体积比为0.5％的甲酸的纯水，B相：体积比为0.5％的甲酸的甲醇，色谱纯；采用梯度洗脱条件，采用常规的C18制备色谱柱，柱温20‑40℃；DAD检测器：检测波长为520nm；根据出峰时间，收集到的花色苷单体吸收峰组分，进一步浓缩，在40‑45℃下，真空旋转蒸发浓缩，得到所述3‑[4‑p‑香豆酰‑L‑鼠李糖基‑(1→2)‑D‑吡喃葡萄糖苷]‑5‑D‑吡喃葡糖苷飞燕草素；其中，所述梯度洗脱条件为0‑3min：体积比为40％的B相；3‑10min：体积比为40％‑50％的B相；10‑12min：体积比为50％‑70％的B相；12‑15min：体积比为70％的B相；15‑17min：体积比为70％‑30％的B相；流速3mL/min；所述盐酸的浓度为12M，所述甲醇、所述乙酸乙酯和所述甲酸均为色谱纯。