一种基于毛细电泳的致脑炎病毒多重基因检测方法

摘要

本发明公开了一种基于毛细电泳的致脑炎病毒的多重基因检测方法，包括如下步骤：(1)生产“致脑炎病毒多重基因检测试剂盒”；(2)采集患者样品，并提取核酸；(3)以患者核酸为模板进行反转录；(4)以反转录产物为模板进行PCR反应；(5)以毛细电泳的方法分离样品。本发明具有灵敏度高、重复性好、准确性强、灵活性强、成本低的优点。

主权项

一种基于毛细电泳的致脑炎病毒的多重基因检测试剂盒，其特征在于包括：反转录引物管、PCR引物管、反转录缓冲液、PCR缓冲液、25mM氯化镁、反转录酶、DNA聚合酶、荧光标记物、阳性对照，所述的反转录引物管中的RT引物、人RNA内参及反应内参的具体核苷酸序列如下表所示，所述的PCR引物管中的PCR引物、人DNA内参及反应内参的的具体核苷酸序列具体如下表所示：检测靶标的中引文对照如下表所示：其中RT反应体系及反应条件：5‑20ng/ul的核酸样品RNA 5uL，DEPC水8uL，5×RT缓冲液4uL，RT引物溶液2uL，RT酶1uL混匀后加入到96孔样品板上进行反转录，反应条件：48℃1分钟；42℃60分钟；95℃5分钟；4℃直至收取RT产物；PCR反应体系及反应条件：RT产物9.3uL，5×PCR缓冲液4uL，25mM的氯化镁4uL，PCR引物溶液2uL，DNA聚合酶0.7uL混匀后加入到96孔样品板上进行PCR反应，反应条件：95℃10分钟；94℃30秒钟，60℃30秒钟，70℃1分钟，循环34次；70℃1分钟；4℃直至收取PCR产物。