发明名称 |
一种常规离心制备高滴度慢病毒产品的方法 |
摘要 |
本发明提供了一种常规离心制备高滴度慢病毒产品的方法,包括如下步骤:取Tris-HCl溶液、NaCl溶液、EDTA溶液进行混合,得到TNE buffer病毒浓缩液;取蔗糖固体用TNE buffer病毒浓缩液溶解,得到病毒提取液;将病毒提取液与慢病毒上清液的混合溶液放入离心机中,在相对离心力1000g~10000g,4℃的条件下离心;去除上清液,随后中加入PBS,得到慢病毒溶液,将慢病毒溶液放入冰箱中4℃条件下静置,上清液即为高滴度慢病毒产品;该方法不需要超高速离心,使用常规离心力即可制备高滴度慢病毒产品,慢病毒产品制备成本低,该方法操作简单,可以广泛用于大部分实验室。 |
申请公布号 |
CN104498442A |
申请公布日期 |
2015.04.08 |
申请号 |
CN201410718290.3 |
申请日期 |
2014.12.02 |
申请人 |
中南民族大学 |
发明人 |
蒋伟;阳小飞;李小红 |
分类号 |
C12N7/00(2006.01)I;C12R1/93(2006.01)N |
主分类号 |
C12N7/00(2006.01)I |
代理机构 |
武汉华旭知识产权事务所 42214 |
代理人 |
刘荣;周宗贵 |
主权项 |
一种常规离心制备高滴度慢病毒产品的方法,其特征在于,包括如下步骤:(1)制备TNE buffer病毒浓缩液:取pH为7.0~7.6的Tris‑HCl溶液,NaCl溶液和EDTA溶液进行混合,得到TNE buffer病毒浓缩液,TNE buffer病毒浓缩液中,Tris‑HCl浓度为30~70mmol/L,NaCl浓度为80~120mmol/L,EDTA浓度为0.3~0.7mmol/L;(2)制备病毒提取液:将蔗糖固体用TNE buffer病毒浓缩液溶解,得到病毒提取液,病毒提取液中蔗糖的质量体积浓度为0.05~0.5g/mL;(3)离心:取慢病毒上清液和病毒提取液放入离心管中,静置形成分层,将装有病毒提取液和慢病毒上清液的离心管放入离心机中,在相对离心力1000g~10000g,2~6℃的条件下离心1~4小时;所述病毒提取液与慢病毒上清液的体积比为1:3~1:5;(4)制备慢病毒产品:按慢病毒上清液:PBS=500:1~50:1的体积比量取PBS备用,去除离心后的离心管中溶液的上清液,随后向离心管中加入PBS,得到慢病毒溶液,保持慢病毒溶液的液面平稳,将慢病毒溶液放入冰箱中,2~6℃条件下静置8~24小时,将静置后的慢病毒溶液的上清液分离取出,上清液即为高滴度慢病毒产品。 |
地址 |
430074 湖北省武汉市洪山区民族大道708号 |