一种从蛇毒中提取降纤酶的方法

摘要

本发明公开了一种从蛇毒中提取降纤酶的方法。其特征在于包含以下步骤：蛇毒干粉的溶解、亲和层析、离子交换层析、凝胶过滤纯化和冷冻干燥以得到降纤酶成品。本发明与现有技术相比，优点在于本发明采用多次层析能有效去除杂质，提高降纤酶的纯度，进而以较高的收率获得纯度高、活性好的降纤酶干粉，大大提高了产品的市场竞争力。

主权项

一种从蛇毒中提取降纤酶的方法，其特征在于，该方法包括如下步骤：（1）蛇毒干粉用含NaCl、EDTA的Tris‑HCl缓冲液溶解，离心去沉淀，得上清液；（2）亲和层析：用含NaCl的Tris‑HCl平衡液平衡Argmatin‑ Sepharose柱，上清液上柱后，用含NaCl、盐酸胍的Tris‑HCl缓冲液洗脱，洗脱液经超滤脱盐至无氯离子；（3）离子交换层析：将上述超滤脱盐后的溶液加NaCl和1mol/L Tris‑HCl稀释至一定浓度，上样于DEAE‑Sepharose Fast Flow柱，用含NaCl的Tris‑HCl平衡液冲洗，换用含不同浓度NaCl的Tris‑HCl洗脱液洗脱，紫外检测，收集酶活性部分，超滤浓缩；（4）凝胶过滤层析：将上述浓缩液上样于Sepharcyl S‑200凝胶柱，用含NaCl的Tris‑HCl缓冲液平衡，紫外检测仪检测并记录，洗脱酶活性峰，超滤后冷冻干燥，即得成品。