以裸纳米金为模拟过氧化物酶的甲胎蛋白测定方法

摘要

本发明公开一种以裸纳米金为模拟过氧化物酶的甲胎蛋白测定方法，是以裸纳米金标记甲胎蛋白抗体，采用双夹心抗体法，利用裸纳米金的模拟过氧化物酶特性，催化过氧化氢和3,3’,5,5’-四甲基联苯胺盐酸盐显色体系，根据显色产物吸光度特征检测甲胎蛋白。在5~100 ng/mL 范围内显色产物吸光度与甲胎蛋白浓度呈线性关系，检测限为1.4 ng/mL。

主权项

一种以裸纳米金为模拟过氧化物酶的甲胎蛋白测定方法，以裸纳米金标记甲胎蛋白抗体，利用双夹心抗体法测定甲胎蛋白，裸纳米金催化过氧化氢氧化3,3’,5,5’‑四甲基联苯胺盐酸盐，根据显色溶液的紫外吸收特征，来测定甲胎蛋白浓度；所使用的裸纳米金采用硼氢化钠还原氯金酸的方法制备，将500 μL浓度为 0.1 g/L 氯金酸水溶液用39.5毫升的水稀释，在剧烈搅拌下加入1.0毫升浓度为0.1 g/L的硼氢化钠水溶液，反应溶液颜色从浅黄色变成酒红色，暗处继续快速搅拌而形成裸纳米金, 所述裸纳米金溶液为酒红色，最大吸收波长为516 nm; 利用裸纳米金催化过氧化氢氧化3,3’,5,5’‑四甲基联苯胺盐酸盐的产物吸光度值A₄₅₀以判断甲胎蛋白的浓度。2.根据权利要求1所述的以裸纳米金为模拟过氧化物酶的甲胎蛋白测定方法，其特征是以裸纳米金标记甲胎蛋白抗体，取22 μg鼠抗人甲胎蛋白抗体加入1.0 mL裸纳米金溶液，振荡反应30 min，高速离心1 h，除去上清，沉淀用1% BSA的PBS溶液洗涤两次后重新定容到1.0 mL;所述双夹心抗体法测定甲胎蛋白是以过氧化氢和3,3’,5,5’‑四甲基联苯胺盐酸盐为底物。3.根据权利要求1或2所述的以裸纳米金为模拟过氧化物酶的甲胎蛋白测定方法，其特征是过氧化氢和3,3’,5,5’‑四甲基联苯胺盐酸盐的体积比为1:1，过氧化氢和3,3’,5,5’‑四甲基联苯胺盐酸盐的体积为50 μL。4.根据权利要求3所述的以裸纳米金为模拟过氧化物酶的甲胎蛋白测定方法，其特征是过氧化氢浓度为6.0 mol/L。5.根据权利要求4所述的以裸纳米金为模拟过氧化物酶的甲胎蛋白测定方法，其特征是3,3’,5,5’‑四甲基联苯胺盐酸盐的浓度为2.4 mmol/L。6.根据权利要求5所述的以裸纳米金为模拟过氧化物酶的甲胎蛋白测定方法，其特征是显色反应为恒温45℃避光反应25 min。7.根据权利要求2所述的以裸纳米金为模拟过氧化物酶的甲胎蛋白测定方法，其特征是将甲胎蛋白抗体包被于96孔酶标板板底，4 ℃封闭过夜；用PBS/T溶液洗涤3次；加入100 μL不同浓度的甲胎蛋白标准品，37℃孵育2 h后用PBS/T溶液洗涤5次，分别加入50 μL的裸纳米金标记甲胎蛋白抗体，37℃孵育2 h；用PBS/T溶液洗涤5次，加2.4 mmol/L 3,3’,5,5’‑四甲基联苯胺盐酸盐和6.0 mol/L H₂O₂各50 μL，恒温45℃避光反应25 min后，在每孔中加入2 mol/L硫酸终止液50 μL终止反应，并用酶标仪测定450 nm处的吸光度值；随着甲胎蛋白浓度的增大，吸光度逐渐增大，在5~100 ng/mL 范围内吸光度与甲胎蛋白浓度呈线性关系，检测限为1.4 ng/mL。