一种血型抗体的间接Dot-ELISA检测方法与应用

摘要

本发明具体公开了一种血型抗体的间接Dot-ELISA检测方法与应用。所述方法为将硝酸纤维素膜固定于96孔板上，然后直接将红细胞膜包被硝酸纤维素膜上，与待测抗体反应，通过酶标二抗形成抗原-抗体复合物。所述Dot-ELISA板可以用商业化的ELISA检测分析仪器，进而能够达到自动化操作的目的，达到节省人力，减少人为误差，和高通量检测的目的。本研究用的斑点酶联免疫吸附测定方法是间接Coombs实验的8倍以上，高灵敏度可以增加低浓度和弱亲和抗体的检测准确度，进一步改进了血型检测方法和改善输血安全。

主权项

一种血型抗体的间接Dot‑ELISA检测方法，其特征在于，包括如下步骤： S1.将硝酸纤维素膜固定于96孔板上； S2.取1～5μL红细胞膜包被硝酸纤维素膜，26～37℃干燥10～30min，用100～250μL 3%的脱脂乳封闭96孔板15～45min； S3.洗板、拍干后向孔中加入100～200μL待检血清溶液，26～37℃反应30～60min； S4.洗板、拍干后向孔中加入100～200μL酶标二抗溶液， 37℃反应30～45min；洗板、拍干后向孔中加入80～150μL底物显色溶液，显色5～10min，终止反应，记录结果；步骤S2所述红细胞膜的制备方法为：向5～20mL抗凝血中加入10～40mL预冷生理盐水，离心得红细胞，按照与红细胞体积比为30～40∶1的量加入预冷0.01 mol/L，pH7.4  Tris‑HCl，4℃放置1～2 h，离心、弃上清，重复3~5 次至无肉眼可见的红细胞为止，沉淀物用PBS溶液溶解即得红细胞膜。