一种从稻瘟病单病斑快速分离病原菌DNA的方法

摘要

本发明提供一种从感染稻瘟病的水稻叶片或穗颈瘟单个病斑上直接提取稻瘟病菌DNA的方法。采用本发明的方法可以从感染稻瘟病的水稻叶片或穗颈上直接提取稻瘟病菌DNA，提取方法简单、快速、成本低，提取的DNA适用于稻瘟病菌无毒基因检测及群体遗传多样性等基于PCR技术的分析。

主权项

一种从感染稻瘟病的水稻叶片或穗颈直接提取稻瘟病菌DNA的方法，该方法包括：(1)、提前分别配制以下四种试剂，灭菌后备用：(1)100mM TrisHCl(pH8.7)、(2)10mM EDTA(pH 8.0)、(3)1M KCl和(4)10％Tween 20；(2)、采集待检测的感染稻瘟病的水稻叶片或穂颈作为样品，从发病的水稻叶片单个病斑上切取约2mm×2mm大小的发病叶片或从发病的穂颈上的单个病斑取1‑2mm长的发病穂颈分别放置于PCR‑96孔板中；(3)、根据样品的数量，将步骤(1)中的100mM TrisHCl(pH8.7)、10mM EDTA(pH8.0)和1M KCl各取适量等体积混合后，然后再根据3种混合液的总体积按1000:1的量加入10％的Tween 20；最后混合均匀后,在预先放入样品的PCR‑96孔板中每孔各加入100μL提取液；(4)、将步骤(3)处理好的样品放入PCR仪，95℃加热处理10min，或将样品放入湿热灭菌锅，在105℃下处理10min，取出样品放置于‑20℃备用。