偶联免疫磁珠的肌钙蛋白诊断试纸条的制备方法

摘要

偶联免疫磁珠的肌钙蛋白诊断试纸条的制备方法：步骤⑴-步骤⑺为试纸条制作：步骤⑻-步骤⑼.为磁珠包被方法：以MES buffer作为活化缓冲液，对表面有羧基的磁珠进行活化；以BST buffer 作为缓冲液，将活化后的磁珠与单克隆抗体16A11/810进行偶联。步骤⑽-步骤⑾为封闭方法：⑿.保存。本发明的制备方法操作简单，结果可靠。新方法所制备的偶联免疫磁珠的肌钙蛋白诊断试纸条克服了现有技术的不足，能够简单快速地检测肌钙蛋白，检测结果更加精准，应用领域较宽，对抗体原料的利用率较高。

主权项

一种偶联免疫磁珠的肌钙蛋白诊断试纸条的制备方法，其特征在于，步骤如下：步骤⑴‑步骤⑺为试纸条制作：⑴.试纸条在32℃过夜干燥；⑵.将NC膜从冰箱取出，剪取适当长度置室温平衡至少2h；⑶.配所需浓度的抗体，2mg/ml的19C7； 方法：19C7抗体用buffer稀释；⑷.将NC膜贴到底板上；⑸.划线之前先用稀NaOH清洗一个循环后静置，再用稀HCl清洗一个循环，静置后用纯水清洗一个循环；划线机配置：1.5μl/cm，用铅笔将划好的T线标记好；⑹. 32~37℃干燥过夜；⑺.干燥结束，贴样品垫、吸水垫、AR膜，随后切条装盒备用；步骤⑻‑步骤⑼.为磁珠包被方法：⑻.活化：以0.01M 2‑(N‑吗啉代)乙磺酸缓冲液作为活化缓冲液，取10μl表面有羧基的磁珠加入离心管中，MSE buffer洗涤，用磁分离器分离后，弃上清液；洗涤3遍后，在离心管中加入242.5μl MES buffer，再加入新鲜配制的1‑(3‑二甲基氨基丙基)‑3‑乙基碳二亚胺溶液2.5μl和0.25g/ml N‑羟基琥珀酰亚胺溶液5μl，振荡混匀，室温下旋转活化磁珠表面的羧基，反应结束后，用MSE buffer洗涤去除反应的活化剂，再用MSE buffer洗涤磁珠；⑼.偶联：以0.02M BST buffer 作为偶联过程的缓冲液；用250μl的BST buffer洗涤磁珠；洗涤完成后，加入适量的单克隆抗体16A11/810，再加入BST buffer，保持离心管内溶液体积为250μl；振荡混匀，使磁珠表面活化的羧基与抗体的氨基在室温下旋转反应；偶联完成后，磁分离器分离收集上清液，备用于检测偶联效率；步骤⑽‑步骤⑾为封闭方法：⑽. 上清液吸取后，在离心管中加入242.5μl的BST 缓冲液和甘氨酸溶液，旋转封闭；⑾.磁分离器分离弃上清液后，加入250μl的1%（W/V）BSA封闭液，对免疫磁珠表面没有完全反应的活化基团进行封闭；⑿.保存：BST buffer洗涤封闭完成的磁珠，最后将免疫磁珠保存重悬在250μl的免疫微球保存液中。