一种从猫豆渣中提取多肽的方法

摘要

本发明公开一种从猫豆渣中提取多肽的方法，其步骤包括原料预处理、微波辅助萃取蛋白质、沉析蛋白质、稀解分离蛋白、酶解、灭活、沉析除杂、蒸发浓缩、微波干燥和粉碎均质。本方法具有效率高，收益好，节约资源的优点，本方法为猫豆资源的综合利用提供了新的途径。

主权项

一种从猫豆渣中提取多肽的方法，其特征在于，该方法包括以下步骤：(1)原料预处理：将猫豆渣与水按照固液比1:20加入容器，浸泡4h后取出，脱水，再取少量猫豆渣与0.2mol/L HCL水溶液按照质量比1:4加入到容器中，加热至温度达到50℃，保温10min，检测溶液中无左旋多巴后，方可进入下一步骤；(2)微波辅助萃取蛋白质：将脱去左旋多巴的猫豆渣按固液比1:10加入软水，调pH＝8.5，将其投入有搅拌装置和冷却水循环、微波频率为2450MHz，功率为20kw的立式微波罐中，控制料液温度55‑60℃，微波萃取反应30min，保温20min，然后用离心机两次过滤脱溶，两次过滤的滤布的细度分别为20和200目，将所得滤渣合并；(3)沉析蛋白质：将1.5％壳聚糖醋酸溶液缓慢加入步骤(2)所得滤渣中并不断搅拌，当溶液pH＝5时停止搅拌，静置4h，分层，取下层沉淀离心、过滤，所得滤渣即为分离蛋白；(4)稀解分离蛋白：加入软水使底物质浓度达7％，搅拌，使分离蛋白溶解，然后调pH＝8.5；(5)酶解I：把稀解分离蛋白溶液投入立式微波罐中，添加碱性蛋白酶占底物质量的2.5％，微波反应20min，控制料液温度<60℃，微波反应结束后，55‑60℃保温20min，在微波反应20min中，前15min每隔5min测pH值1次：第1次若测得pH<8时，则调pH值＝8.2‑8.3；第2次若测得pH值<7.5时，则调pH值＝7.8‑8.0；第3次若测得pH值<7.5时，则调pH值＝7.5；(6)酶解Ⅱ：当酶解Ⅰ结束后，控制料液pH值＝7.5，添加木瓜蛋白酶占底物质量的2.5％，控制料液温度<55℃，微波反应20min，保温20min，微波反应的前15min每隔5min测定1次pH值：第1次若测得pH值<7.0时，则调pH值＝7.2‑7.3；第2次若测得pH值<6.8时，则调pH值＝7.0；第3次若测得pH值<6.8时，则调pH值＝7.0；(7)灭活：待步骤(6)结束后，关闭微波罐的冷却循环，开启升温，使料液温度达到80‑90℃，保温10min；(8)沉析除杂：将酶解液排出，待温度冷却至40℃以下时，加入壳聚糖酸溶液，调节酶解液pH＝5，静置3‑4h、分层、过滤下层浓液、将其干燥，温度≤70℃，上清液和滤液为多肽液；(9)蒸发浓缩：将多肽液投入真空浓缩器中，减压浓缩使其浓度>60％；(10)微波干燥：将步骤(9)中所得多肽浓浆投入微波干燥器中，控制温度<65℃，得多肽干粉；(11)粉碎均质：将步骤(10)中所得多肽干粉粉碎、混合均匀，即得多肽成品。