芘标记的单链DNA荧光探针及其制备方法

摘要

本发明涉及一种荧光基团芘接枝的聚4-乙烯基吡啶阳离子聚电解质的合成，并由此制备单链DNA复合荧光探针的方法。芘接枝聚4-乙烯基吡啶阳离子聚电解质的合成步骤：（1）用芘甲醇和三溴化磷制备芘甲溴；（2）将芘甲溴按一定的单体摩尔比接枝到聚4-乙烯基吡啶上；（3）将步骤（2）的产物用溴代正丁烷季氨化得到水溶性阳离子聚电解质。该聚电解质与单链核酸在缓冲液中通过静电及疏水作用互相吸附形成复合探针，实验中通过荧光变化来检测目标单链DNA碱基与探针DNA是否互补。本发明的优点是合成路线简单，容易操作，成本低，且探针对DNA的特异性识别快速、灵敏。

主权项

一种水溶性的芘标记的聚4‐乙烯基吡啶聚电解质的制备方法，其步骤包括：(1)荧光基团芘甲溴分子的制备：冰点温度下将芘甲醇溶于三氯甲烷中，将摩尔量是芘甲醇的1/2倍的三溴化磷加入该溶液，冰浴搅拌12个小时，然后加入饱和碳酸氢钠水溶液至中性，分层，取有机层进行蒸馏，重结晶，并干燥得到芘甲溴；(2)将芘甲溴接枝到聚4‑乙烯基吡啶上：将聚4‑乙烯基吡啶溶于三氯甲烷中，再加入1/10于聚4‑乙烯基吡啶单体摩尔量的芘甲溴，68℃下搅拌、回流24小时，然后将反应液缓慢滴加入四氢呋喃中得到沉淀，过滤，洗涤，干燥后得到中间产物；(3)用溴代正丁烷进一步接枝到中间产物：将中间产物溶于乙醇，并加入5倍于聚4‑乙烯基吡啶单体摩尔量的溴代正丁烷，85℃下搅拌、回流24个小时，然后将反应液缓慢滴加入四氢呋喃中得到沉淀，过滤，洗涤，干燥得到产物阳离子聚电解质，即水溶性的芘标记的聚4‑乙烯基吡啶聚电解质。