一种土壤微生物基因组的提取方法

摘要

一种土壤微生物基因组的提取方法，采用Ca(OH)₂水溶液、磷酸盐和NaOH溶液对土壤进行预处理使土样分散均匀释放被土质包裹的细胞，用溶菌酶、蛋白酶k和SDS共同作用裂解细胞，氯仿/异戊醇变性蛋白质，乙醇沉淀DNA得到粗提物，再用BaCl₂和CaCl₂混合液对粗提DNA溶液处理进一步去除腐殖酸等杂质，再用乙醇沉淀得到纯化的基因组DNA。采用本方法得到的DNA纯度和产量均可用于后续PCR等操作中，并且可在4h之内完成，使用常规试剂，不仅大大节约了时间，而且适合在实验室进行。上述提取方法也适用于其他土质如粘性土壤和沙质土壤，也适用于河底污泥等。

主权项

一种土壤微生物基因组的提取方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)将土壤加入到离心管中，并加入氢氧化钙水溶液，振荡使土样分散，得到土壤混合液；其中，土壤与氢氧化钙水溶液中氢氧化钙的比为(5‑10)g：(10‑20)mmol；(2)向土壤混合液中加入磷酸盐溶液和氢氧化钠溶液，振荡使土壤中的细胞释放，然后进行离心，收集沉淀；其中，土壤与磷酸盐溶液中磷酸盐、氢氧化钠溶液中氢氧化钠的比为(5‑10)g：(0.1‑0.25)mmol：(0.1‑0.25)mmol；(3)向沉淀中加入DNA提取液、溶菌酶溶液和蛋白酶k溶液，然后于60‑70℃下加热后得到溶液A；其中，沉淀、DNA提取液、溶菌酶溶液和蛋白酶k溶液的加入量比为(0.5‑1.5)g：(500‑1500)μL：(30‑90)μL：(20‑60)μL；(4)向溶液A中加入氯仿与异戊醇的混合物，震荡至溶液变成乳浊液后进行离心，吸取上清液；其中，氯仿与异戊醇的混合物的体积是溶液A体积的0.8‑1.2倍；(5)向上清液中加入乙醇水溶液并进行离心，将所得沉淀晾干或烘干，得到DNA粗提物，将DNA粗提物进行纯化，得到基因组DNA。