奶山羊冷冻精液稀释液及其制备方法和稀释方法、以及奶山羊冷冻精液细管冻精的制备方法

摘要

本发明涉及奶山羊冷冻精液稀释液及其制备方法和稀释方法、以及奶山羊冷冻精液细管冻精的制备方法。现有冷冻精液保存方法，精子受低温打击致使质膜结构改变，严重影响质膜的完整性及其复苏后的活率及受精能力。本发明对新鲜精液进行两步稀释、平衡及两步降温细管冷冻处理，其中，基础稀释液由Tris、柠檬酸、葡萄糖、海藻糖、Vc、GSH、BSA、ATP、复合抗生素、卵黄加水配成，冷冻稀释液由基础稀释液加甘油配成；利用稀释液对鲜精进行稀释和平衡后，分装于细管，储存于液氮中。本发明对奶山羊精液低温保存和冷冻保存具有良好效果，有效提高解冻后活率、顶体完整率及质膜完整性，降低畸形率，提高奶山羊冻精生产效率及冻精品质。

主权项

奶山羊冷冻精液基础稀释液的制备方法，其特征在于：由以下步骤实现：步骤一：按以下比例准备各组分：三羟甲基‑氨基甲烷    300‑400 mM；柠檬酸    100‑130 mM；葡萄糖    35‑45 mM；海藻糖    260‑300 mM；维生素C    4‑6 g/L；还原型谷胱甘肽    4‑6 mM；牛血清白蛋白    8‑12 g/L；三磷酸腺苷    0.7‑1.5 mM；步骤二：将上述组分与双蒸水按比例混匀后，0.2μm 滤膜过滤，加入复合抗生素；步骤三：按体积比15‑25 %的比例，在步骤二得到的混合液中加入卵黄添加液，充分混匀，得到基础稀释液；步骤二中，加入复合抗生素，即加入0.05‑0.055 g/L的泰乐菌素、0.27‑0.28 g/L的庆大霉素、0.16‑0.18 g/L的林可霉素以及0.3‑0.35 g/L的奇霉素；步骤三中，卵黄添加液由以下步骤制得：将新鲜无病原菌鸡蛋经过双氯苯双胍己烷浸泡后抽取卵黄液，以质量体积比为0.035%加入十二烷基磺酸钠，15╳10³ g离心1 h，吸取上清液经0.45μm滤膜过滤得到卵黄添加液。