胁迫雨生红球藻快速积累虾青素的方法

摘要

本发明公开了一种胁迫雨生红球藻快速积累虾青素的方法，属水产养殖领域。以前，雨生红球藻采用环形跑道式水泥池或光生物反应器培养，虾青素产率低，易污染，工艺复杂，操作麻烦，基建投资大，成本高。本发明采用二阶段养殖法，第一阶段在三角烧瓶中培养，设置较低的温度和光照强度，有利于藻细胞生长且避免强光对细胞造成光伤害，第二阶段采用白塑料桶充气培养，提高了温度和光照强度并延长了光照时间，有利于虾青素积累。本发明还对传统培养液配方进行了优化，营养更全面、均衡，成本低，操作灵活、方便，虾青素产量提高120％。

主权项

一种胁迫雨生红球藻快速积累虾青素的方法，其特征在于具体步骤如下：步骤(1)培养液的准备培养液成分：Ca(NO₃)₂ 0.4份，NaH₂PO₄ 0.1份，MgSO₄·7H₂O 0.05份，CuSO₄·5H₂O 0.02份，MnCl₂·4H₂O 0.1份，FeSO₄·7H₂O 0.04份，尿素0.5份，人尿1份，泛酸钙0.03份，麦饭石粉0.04份，α‑萘乙酸0.002份，肌醇0.001份，叶酸0.004份，尼古丁酸0.001份，维生素H 0.008份，EDTA 0.04份，土壤浸出液1.2份，冷开水1000份；装入棕色磨口塞试剂瓶中，摇匀，密封，置入4℃冰箱保存备用；步骤(2)三角烧瓶培养取一3000毫升三角烧瓶，加入1500毫升步骤1所述培养液，选生长旺盛、无污染、处于指数生长期的雨生红球藻藻种接种，接种要在上午9‑10点进行，接种密度4万个细胞/每毫升，轻轻摇匀，报纸和橡皮筋封口，放在微藻培养室中进行培养，空调控温，日光灯管提供光照，不充气，调节温度至26℃，光照强度至5000lux，光暗周期＝12h/L+12h/D，即提供间歇光，12小时光照，12小时黑暗，每天手动摇瓶3次，每次45秒钟，连续培养7天，转入下一步骤；步骤(3)白塑料桶培养取一65升带盖的大口白塑料桶(市场有售)，加入步骤1所述培养液40升，再加入步骤2所述藻液1800毫升，轻轻摇动3分钟，盖上盖子，进行培养。盖子上打上2个孔，每个孔直径10毫米，插入2根管子，一根为塑料管，长3米，直径8毫米，一端连接空气压缩机，另一端插入到藻液底部，用以充气，充入混合气体，气体成分＝空气98％+纯CO₂2％，连续不间断充气，气量不宜太大，以让藻细胞浮起不下沉即可；另一根较短，长30厘米，直径10毫米，为比较硬的料管，用以排气；将此塑料桶放入微藻培养室中培养，室内空调控温，日光灯管照明，以打开灯管的数量多少来控制光照强度，提供连续不间断光照，连续培养8天，前4天调节温度至28℃，光照强度18000lux(因塑料桶壁的阻挡和吸收作用，到达藻液的实际光照强度约为12000lux)，后4天，调节温度至30℃，光照强度20000lux，后转入下一步骤；步骤(4)藻细胞收集取步骤3所述藻液1000份，加入0.5份甲壳素，充分搅拌15分钟，再加入0.8份明矾，搅拌20分钟，静置、沉淀36小时，弃上清液，取底部红色藻泥，藻细胞收集完毕。