主权项 |
一种用于治疗肺癌的中药克方10个指标成分的质量控制方法,步骤如下:克方样品制备:a. 克方药材:精密称取猫爪草5-15份、金荞麦5-15份、鱼腥草5-15份、仙鹤草5-15份、冬瓜子5-15份、山茨菇10-20份、苏木10-20份、红花10-20份、法半夏10-20份、胆南星5-15份、沙参5-15份、玉竹5-15份、麦冬5-15份共20‑40g粉碎,加50%‑80% 乙醇100‑400ml,加热回流提取0.5‑1.5h,过滤,提取3次,滤液减压浓缩至40‑80 ml,取5-10 mL旋干,用70%甲醇溶解定容至25mL,过0.45µm滤膜,作为克方药材供试品溶液;b.克方制剂:取以上克方药材提取、精制、浓缩,再加适量糊精辅料加工成颗粒剂,精密称取克方颗粒10‑20g,研碎,加70% 甲醇100‑200ml,超声提取0.5‑1.0h,过滤,提取2次,滤液减压浓缩至20‑40 ml,取5‑10 mL用70%甲醇定容至25mL,过0.45µm滤膜,作为克方制剂供试品溶液;混合对照品溶液制备:精密称取羟基红花黄色素35.30mg、巴西苏木素12.42mg、儿茶素0.46mg、金丝桃苷0.408mg、芦丁0.55mg、异槲皮苷0.34mg、木犀草苷0.11mg、槲皮苷1.22mg、芹菜素‑7‑O‑葡萄糖苷0.14mg、槲皮素0.24mg 10种对照品置于10 mL量瓶中,加70%甲醇使溶解并定容至刻度,制得混合对照品供试液,于4℃保存备用;(3)色谱条件: 色谱柱:Diamonsil C18柱(4.6×250mm,5µm);流动相:A‑乙腈,B‑1.5%冰醋酸水溶液,梯度洗脱:0~10min 4~5%A, 10~15min 5~10%A, 15~20min 10~15%A, 20~30min 15%A, 30~32min 15~18%A, 32~55min 18%A, 55~60min 18~32%A, 60~65min 32~33%A, 65~75min 33%A, 75~85min 33~35%A, 85~90min 35~37%A;检测波长:280nm、350nm;流速:1.0mL·min<sup>‑1</sup>;柱温:30℃;进样量:20μL;分析时间:90min;(4)校正因子fkm的计算:混合对照品溶液进样10,5,2,1,0.5μL,用高效液相色谱测定色谱图并进行峰面积积分,选取槲皮素为内标化合物,分别计算儿茶素、巴西苏木素、羟基红花黄色素A、芦丁、金丝桃苷、异槲皮苷、木犀草苷、槲皮苷及芹菜素‑7‑O‑葡萄糖苷的相对校正因子fkm;(5) 克方样品中10个指标成分的质量测定:a. 取克方供试液注入高效液相色谱仪,按以上色谱条件测得色谱图;b. 以槲皮素为内标,按回归方程计算槲皮素质量,槲皮素的回归方程为:Y=1.2×10<sup>6</sup>X‑5165.8(280nm检测波长)、Y=2.6×10<sup>6</sup>X‑2700.4(350nm检测波长);c. 儿茶素、巴西苏木素、羟基红花黄色素A、芦丁、金丝桃苷、异槲皮苷、木犀草苷、槲皮苷及芹菜素‑7‑O‑葡萄糖苷的质量按公式计算;公式为:Wm=(Wk×Am)/(fkm×Ak)式中Ak为槲皮素内标物峰面积,Wk为槲皮素内标物质量;Am为被测组分m的峰面积,Wm为被测组分m的质量,fkm为儿茶素、巴西苏木素、羟基红花黄色素A、芦丁、金丝桃苷、异槲皮苷、木犀草苷、槲皮苷及芹菜素‑7‑O‑葡萄糖苷的校正因子;d. 克方药材或制剂中槲皮素、儿茶素、巴西苏木素、羟基红花黄色素A、芦丁、金丝桃苷、异槲皮苷、木犀草苷、槲皮苷及芹菜素‑7‑O‑葡萄糖苷的质量分别为0.0122~0.0456 mg/g、 0.0112~0.0922 mg/g、 0.1043~1.5024 mg/g、 0.6930~1.4242 mg/g、 0.0114 ~0.1267mg/g、 0.0122~0.0851mg/g、 0.0105~ 0.0775mg/g、 0.0011~0.0315mg/g、0.0314~0.4325 mg/g、 0~0.0082 mg/g。 |