一种筛选丝裂原活化蛋白激酶抑制剂高通量筛选方法

摘要

本发明发现了一种筛选丝裂原活化蛋白激酶抑制剂高通量筛选方法，包括以下步骤：(1)丝裂原活化蛋白激酶抑制剂筛选模型的建立与优化：进行激酶浓度、温孵时间、底物浓度、ATP浓度实验；(2)阳性药验证模型可靠性：选用合适浓度的激酶，ATP Km，底物Km，激酶和底物每孔分别加入2μl，再按浓度梯度每孔加入4μl阳性药，加入2ul ATP开始反应，按优化时间室温孵育；每孔加入10μl终止液终止反应，室温孵育1小时后检测，分析数据得阳性药IC₅₀；(3)高通量筛选模型验证：按照上述步骤操作，使用Biomek NX^P自动化加样仪器和Multidrop自动分液器进行加样，计算Z因子。本发明的优点主要有：1)简便快捷；2)灵敏度高；3)结果稳定可靠，重现性好，可用于高通量筛选。

主权项

一种丝裂原活化蛋白激酶抑制剂高通量筛选模型，其特征在于，包括步骤： (1)激酶抑制剂筛选模型的建立与优化； (2)阳性药验证模型可靠性； (3)高通量筛选模型验证。