一种重组人骨形态发生蛋白-2的纯化生产方法

摘要

本发明公开了一种重组人骨形态发生蛋白-2的纯化生产方法。该方法包括如下步骤：1）裂解含有rhBMP-2蛋白的包涵体，得到包涵体裂解液；2）对所述包涵体裂解液依次进行亲和层析和阳离子交换层析，分离纯化得到变性重组人骨形态发生蛋白-2溶液；3）对所述变性rhBMP-2蛋白进行复性，得到复性rhBMP-2蛋白粗品；4）对所述复性rhBMP-2蛋白粗品依次进行亲和层析和凝胶过滤层析分离纯化，得到复性rhBMP-2蛋白纯品。利用本发明所提供的方法纯化rhBMP-2蛋白，制备的产品纯度达95%以上，蛋白收率为9.4%，内毒素和DNA残留均符合生物药物质量要求，本发明方法适于工业规模化生产；同时也为同类重组蛋白药物的研发生产提供参考。

主权项

一种重组人骨形态发生蛋白‑2的纯化生产方法，包括如下步骤：1）裂解含有重组人骨形态发生蛋白‑2的包涵体，得到包涵体裂解液；2）按照如下a1）和a2）的步骤对所述包涵体裂解液进行分离纯化，得到变性重组人骨形态发生蛋白‑2溶液：a1）将所述包涵体裂解液进行亲和层析，收集洗脱峰；所述亲和层析中所采用的配基为肝素，所采用的洗脱程序为NaCl一步洗脱；所述收集洗脱峰为收集进行所述NaCl一步洗脱过程中所产生的洗脱峰；a2）将从步骤a1）中收集的洗脱峰进行阳离子交换层析，收集洗脱峰，即为所述变性重组人骨形态发生蛋白‑2溶液；所述阳离子交换层析中所采用的阳离子交换基团是SP，所采用的洗脱程序为NaCl一步洗脱；所述收集洗脱峰为收集进行所述NaCl一步洗脱过程中所产生的洗脱峰；3）对步骤2）中得到的变性重组人骨形态发生蛋白‑2溶液进行复性，得到复性重组人骨形态发生蛋白‑2粗品溶液；4）按照如下b1）和b2）的步骤，对步骤3）中得到的复性重组人骨形态发生蛋白‑2粗品溶液进行分离纯化，得到复性重组人骨形态发生蛋白‑2纯品溶液：b1）将步骤3）中得到的复性重组人骨形态发生蛋白‑2粗品进行亲和层析，收集洗脱峰；所述亲和层析中所采用的配基为肝素，所采用的洗脱程序为NaCl线性洗脱；所述洗脱峰为NaCl在洗脱液中的浓度线性增至0.45M时开始起峰的紫外吸收峰；b2）将从步骤b1）中收集的洗脱峰进行凝胶过滤层析，收集洗脱峰，即为所述复性重组人骨形态发生蛋白‑2纯品溶液。