累积的时间分辨发射双向凝胶电泳

摘要

本发明为蛋白质的胶内检测和定量提供了一种新的仪器设计。这种新平台称为累积的时间分辨发射双向凝胶电泳(CuTEDGE)，利用荧光寿命成像的差异来区分来自特异性蛋白质标记的荧光和非特异性背景荧光，致使与现有技术相比在灵敏度和动态范围方面均有明显的改进。该平台主要用于双向凝胶电泳的图像获取，但也用于单向凝胶系统的蛋白质检测以及电转移到例如PVDF膜上的蛋白质。考虑到与现有方法相比，在检测和动态范围方面增加了高达5-6个数量级，所描述的发明在低丰度细胞蛋白质的检测中代表了技术的飞跃，这种技术的飞跃是生物标志物发现的领域中迫切需要的。

主权项

一种单向或双向凝胶电泳图像获取的改进方法，其特征在于，所述方法用脉冲激光扫描仪激发与蛋白质结合的荧光染料以便提供逐个像素水平上的用于蛋白质的胶内检测和定量的荧光寿命成像测定，和利用荧光衰减曲线的多指数拟合来分离来源于荧光染料标记的蛋白质种类的荧光、来源于凝胶基质本身、溶液或存在于凝胶中的微粒的来源的荧光，或来源于散射效应的荧光，用于随后的背景减除。