岩白菜嫩叶组培快繁方法

摘要

本发明涉及一种岩白菜嫩叶组培快繁方法。岩白菜于自然野生条件下出苗率低和根状茎繁殖系数低；而播种育苗出苗率低，繁殖系数低；扦插育苗会消耗掉部分产品器官，造成生产效率下降。本方法包括以下步骤：外植体的取材和消毒灭菌、愈伤组织诱导培养、不定芽诱导培养、芽增殖培养、生根培养、炼苗移栽。本发明还提供了本方法所使用的培养基的组分配比。本发明将岩白菜嫩叶组培成苗，不仅比种子和根状茎易获取，且繁殖系数高，不受季节气候限制，可随时满足生产用苗；同时，嫩叶愈伤组织诱导可适用于各种叶用药物成分的工厂化生产；另外，本方法结合人工诱变和转基因技术，可创新种质，为岩白菜新品种培育奠定基础。

主权项

一种岩白菜嫩叶组培快繁方法，其特征是：该方法包括以下步骤，步骤1)：外植体的取材和消毒灭菌选取健康、新鲜的未展或初展开嫩叶，用自来水冲洗干净，先用70％酒精消毒30s，再用0.1％升汞溶液灭菌6～7min，最后用无菌水冲洗3～4次，在超净台无菌条件下将叶片切成约1.0cm²的方块作为待接种用外植体；步骤2)：愈伤组织诱导培养将由步骤1)得到的大小约1.0cm²的叶块接种到愈伤组织诱导培养基上，在23℃恒温培养箱中，1500～2500Lx，光照12h/d培养，25～30d形成愈伤组织；步骤3)：不定芽诱导培养将由步骤2)得到的愈伤组织块转接至不定芽诱导培养基上，在22±2℃，1500Lx，光照10～12h/d培养，15‑20d形成不定芽；步骤4)：芽增殖培养将由步骤3)得到的丛生不定芽转接至芽增殖培养基中，在22±2℃，1500Lx，光照10～12h/d培养，15～25d形成继代丛生芽，依丛生芽数量的需求，每隔20～25d依同法进行转接再增殖；步骤5)：生根培养将由步骤4)得到的、苗高2～3cm的无根苗转接至生根培养基上，在22±2℃，1500Lx，每天10～12h光照条件下培养25～30d，基部形成10条根以上，即成为生根组培苗；步骤6)：炼苗移栽瓶内炼苗：将由步骤5)得到的生根组培苗带瓶移出培养室外，在普通大棚内自然光照和温度条件下放置1周，然后打开瓶盖炼苗2～3d；移栽炼苗：自来水洗净组培苗根部培养基，用灭菌和生根混合溶液浸泡根部30s至1min，稍沥干后移栽至珍珠岩和蛭石对半混合的基质中，注意喷雾保湿和避免强光照射，两周后进入常规管理，组培苗移栽成活率90％以上，继续培养1～2个月后即得岩白菜种苗；步骤2)中所述的愈伤组织诱导培养基为MS+2,4‑D 0.2mg/L+6‑BA0.5mg/L+NAA 0.4mg/L+活性炭3g/L；步骤3)中所述的不定芽诱导培养基为MS+6‑BA 2.0mg/L+NAA0.2mg/L+活性炭3g/L；步骤4)中所述的芽增殖培养基为MS+6‑BA 2.0mg/L+NAA0.2mg/L+KT 2.0mg/L+活性炭3g/L；步骤5)中所述的生根培养基为1/2MS+NAA 0.5mg/L+活性炭3g/L；所述MS为MS培养基，其中含有蔗糖30g/L，琼脂条8g/L，其pH为5.5～6.0。