一种提取人肿瘤细胞膜蛋白的方法

摘要

本发明公开了一种提取人肿瘤细胞细胞膜蛋白的方法，包括细胞的破碎、差速离心分离细胞膜、膜蛋白的溶解以及膜蛋白纯度的Western Blot检测。本发明主要是针对人肿瘤细胞膜蛋白的提取，为肿瘤细胞膜蛋白组学研究提供新的方法。此发明将有助于进一步进行关于抗肿瘤药物致人肿瘤细胞膜蛋白表达水平影响的机制研究，为抗肿瘤药物靶点的筛选及相关研究提供有用的技术手段。

主权项

一种提取人肿瘤细胞膜蛋白的方法，其特征在于，按照以下步骤进行：(1)对所收集的人肿瘤细胞使用10mmol/L Tris‑HCl溶液中，于冰上使用Dounce匀浆器匀浆；(2)匀浆液在4℃以4000rpm的离心后收集上清液，沉淀为未破碎细胞及细胞核；(3)细胞上清液在4℃以14400rpm离心后收集上清液，沉淀为线粒体；(4)细胞上清液在4℃以35300rpm离心后收集沉淀，上清液为细胞浆溶液；(5)沉淀用膜蛋白裂解液于冰上裂解；使用的膜蛋白裂解液组成有效成分为7mmol/L尿素，2mmol/L硫脲，4％对称型表面活性剂化合物，40mmol/L DTT；(6)经过截留分子量为3000道尔顿的超滤膜超滤处理后，分装。