一种过表达CIAPIN1蛋白的细胞系及其制备方法和应用

摘要

本发明公开了一种过表达CIAPIN1蛋白的细胞系及其制备方法和应用；该细胞系名称为BHK-21CIAPIN1⁺，保藏编号为CCTCCC2014149，其表达CIAPIN1蛋白的量是正常BHK-21细胞的10倍；该细胞系的制备方法为将CIAPIN1的cDNA序列插入真核表达质粒pIRESneo中，再转染BHK-21细胞；经含G418培养液筛选后细胞经极限稀释法获得阳性单克隆细胞，即为永生化过表达CIAPIN1蛋白的细胞系。本发明细胞系培养狂犬病病毒可显著影响病毒增值滴度，对该病毒的高效培养及其灭活疫苗的生产意义重大，本发明细胞系在狂犬病病毒的培养中具有很好的应用前景。

主权项

一种过表达CIAPIN1蛋白细胞系的制备方法，其特征在于：包括以下步骤：1）构建重组真核表达质粒：RT‑PCR扩增CIAPIN1蛋白的cDNA 序列，并将其插入真核表达质粒pIRESneo中，获得重组真核表达质粒pIRES‑CI；2）转染：将上述重组真核表达质粒转染BHK‑21细胞；3）筛选：将转染后的细胞以含G418 的培养液进筛选培养；4）获得永生化过表达CIAPIN1蛋白的细胞系：将经筛选培养的细胞经极限稀释法获得阳性单克隆细胞，其中能过表达CIAPIN1蛋白的即为永生化过表达CIAPIN1蛋白的细胞系。