乳酸粪链球菌的发酵方法

摘要

本发明为一种乳酸粪链球菌的发酵方法，解决了现有乳酸粪链球菌在发酵过程中存在菌数偏低的问题。本发明方法由一、二、三级培养基的配制，一、二、三级种子培养，发酵罐培养液的配制和发酵罐内培养液的发酵四个步骤完成。本发明方法中的培养基成分易得且价格便宜，工艺参数简单、发酵周期短，所得的乳酸粪链球菌活菌数高且质量稳定，乳酸粪链球菌活菌数可以达到不少于50亿个/ml，显著提高了产品质量，值得推广使用。

主权项

一种乳酸粪链球菌的发酵方法，其特征在于，包括如下步骤：1）一、二、三级培养基的配制：按质量比为100:6:12:20:20:20分别称取牛心浸液、氯化钠、蛋白胨、猪肝浸液、羊肝浸液和葡萄糖，将牛心浸液、氯化钠、蛋白胨、猪肝浸液和羊肝浸液混合得到混合液A，向混合液A中添加碳酸钠调节混合液A的pH至7.2‑7.4，然后将混合液A煮沸过滤后得到滤液A，将葡萄糖添加到滤液A中搅拌均匀得到混合液B，分别取15ml混合液B作为一级培养基、取150ml混合液B作为二级培养基、取800ml混合液B作为三级培养基，其中，一级培养基中添加有质量为15ml混合液B质量1.5‑2%的琼脂，一、二、三级培养基经115℃蒸汽灭菌25min后，再空白培养24h，最后置于冰箱保存备用，冰箱温度控制在4‑8℃；2）一、二、三级种子培养：取乳酸粪链球菌作为菌种接入空白斜面试管内并在37‑39℃下培养18‑20h得到斜面菌种，其中，所取的乳酸粪链球菌的质量与步骤1）中牛心浸液的质量比为0.5:100；将得到的斜面菌种接入一级培养基中并在37‑39℃下培养18‑20h得到一级种子，将一级种子接入二级培养基中并在37‑39℃下培养18‑20h得到二级种子，将二级种子接入三级培养基中并在37‑39℃下培养18‑20h得到三级种子；3）发酵罐培养液的配制：按质量比为9:9:72:20:20:18:72：400:1400分别称取牛肉膏、氯化钠、蛋白胨、猪肝浸液、羊肝浸液、碳酸钙、葡萄糖、纯化水A和纯化水B；将称量好的纯化水A、牛肉膏、氯化钠和蛋白胨加入夹层锅内，打开夹层锅的蒸汽阀，加热搅拌使其充分溶解，加热温度为80‑85℃，再将称量好的猪肝浸液和羊肝浸液加入到夹层锅内，搅拌均匀得到混合液C，通过向混合液C中添加碳酸钠调节混合液C的pH至7.2‑7.4，最后过滤混合液C得到滤液B；将滤液B以及称量好的纯化水B、碳酸钙、葡萄糖加入发酵罐中搅拌均匀得到培养液A，对培养液A进行121℃蒸汽灭菌25min后，放冷至37‑40℃；4）发酵罐内培养液的发酵：将步骤2）中得到的三级种子加入到发酵罐内的培养液A中，三级种子与培养液A的质量比为1:580，然后在39‑41℃培养16‑18h，培养过程中每隔1h开动发酵罐搅拌一次，每次搅拌10min，等发酵罐内的碳酸钙完全消失时，发酵完成即可放罐；其中，所述的牛心浸液制备方法如下：取新鲜的牛心，除去脂肪、筋膜及血管，切细绞碎得到牛心肉末，取牛心肉末并加纯化水，纯化水的添加量为每3g牛心肉末添加10ml纯化水，将添加纯化水的牛心肉末置于冰箱中浸渍18h以上，冰箱温度控制在4‑8℃，然后取出水浴加热至肌肉凝结成饼状并浮于液面，水浴加热温度控制在98‑100℃，浸液呈澄明淡黄色，放冷至室温，过滤得到的滤液即为所述的牛心浸液；猪肝浸液、羊肝浸液的制备方法与牛心浸液的制备方法相同。