一种液体微胶囊包埋、分化全能干细胞成心肌细胞的方法

摘要

一种液体微胶囊包埋、分化全能干细胞成心肌细胞的方法，包括如下步骤：（1）将全能干细胞和海藻酸钠DMEM培养基溶液混合均匀；（2）包埋有全能干细胞的海藻酸钠形成凝胶微胶囊；（3）加入到聚赖氨酸溶液中，形成海藻酸钠/聚赖氨酸保护壳；（4）加入到柠檬酸钠溶液中，海藻酸钠凝胶的内核液化，海藻酸钠/聚赖氨酸保护壳完好无损；（5）分离步骤（4）中含有干细胞团和海藻酸钠/聚赖氨酸保护壳的凝胶微胶囊，定向诱导分化成心肌细胞。本发明通过海藻酸钠包埋，海藻酸钠/聚赖氨酸外壳保护，微胶囊内核液化提供了一种高效包埋、分化全能干细胞（胚胎干细胞、诱导胚胎干细胞）成心肌细胞的方法。

主权项

一种液体微胶囊包埋、分化全能干细胞成心肌细胞的方法，其特征在于,所述方法包括如下步骤：（1）将全能干细胞和质量分数0.5‑3％的海藻酸钠DMEM培养基溶液混合均匀；（2）通过静电滴液法或气流喷射法方式，使细胞、海藻酸钠混合液流经26‑28G的针头滴入0.1‑0.6M氯化钙溶液中，静置３‑10分钟，包埋有全能干细胞的海藻酸钠形成凝胶微胶囊；（3）分离步骤（２）中凝胶微胶囊，加入到质量分数0.01%‑0.2%聚赖氨酸溶液中，放置2‑10分钟，形成一层海藻酸钠/聚赖氨酸保护壳；（4）分离步骤（３）中的具有海藻酸钠/聚赖氨酸保护壳的凝胶微胶囊，加入到5‑60mM柠檬酸钠溶液中，静置３‑10分钟，海藻酸钠凝胶的内核液化，全能干细胞在液体内核中自动聚合成一个干细胞团，海藻酸钠/聚赖氨酸保护壳完好无损；（5）分离步骤（4）中含有干细胞团和海藻酸钠/聚赖氨酸保护壳的凝胶微胶囊，加入到心肌细胞定向诱导培养液中，之后转移至搅拌式生物反应器中培养，使接种细胞浓度在2‑5万细胞每毫升，保持反应体系温度在35‑37ºC，体系中二氧化碳体积分数在4‑7%，定向诱导分化成心肌细胞。