量化和/或分析键特异性多泛素链的方法

摘要

本发明提供了一种量化和/或分析键特异性多泛素链的方法，该方法为：将报告蛋白分为N末端片段和C末端片段，将两个片段分别与泛素结合结构域(UBD)融合表达，然后将上述融合两个报告蛋白片段的UBD同时与目的样品作用；当UBD结合于特异多泛素链，报告蛋白的两段会互补形成完整功能的蛋白，然后通过对互补形成的完整报告蛋白检测来量化和/或分析键特异性多泛素链。并通过实验得到了能够在体外或细胞内结合分析K48或K63特异性多泛素链的EPN1的UIM与报告蛋白制备的融合蛋白。

主权项

一种量化和/或分析键特异性多泛素链的方法，其特征在于：将报告蛋白分为N端片段和C端片段，将两个片段分别与泛素结合结构域融合表达，然后将上述融合两个报告蛋白片段的泛素结合结构域同时与目的样品作用；当泛素结合结构域结合于特异多泛素链，报告蛋白的两段会互补形成完整功能的蛋白，然后通过对互补形成的完整报告蛋白检测来量化和/或分析键特异性多泛素链；其中，所述的泛素结合结构域的氨基酸序列如SEQ ID NO：1所示；所述的报告蛋白为荧光素酶(Gluc)，其N段氨基酸序列如SEQ ID NO：4所示，C端片段氨基酸序列如SEQ ID NO：5所示；所述报告蛋白与泛素结合结构域之间通过linker连接，所述linker序列如所示SEQ ID NO：6；所述的键特异性多泛素链为K48或K63特异性连接的多泛素链。