一种甜樱桃砧木高效脱毒方法

摘要

本发明涉及一种甜樱桃砧木脱毒方法，包括步骤：1)取田间甜樱桃砧木叶芽作为组培用外植体，经消毒、培养，获得组培苗，2)继代培养，3)热处理，4)预培养、装载，5)玻璃化，6)冷冻，7)冷冻后进行水浴解冻，后进行恢复处理1-2次，然后进行诱导成苗；8)诱导成苗，9)病毒检测。本发明利用热处理结合超低温冷冻疗法脱除甜樱桃砧木李属坏死环斑病毒获得的‘吉塞拉6号’脱毒苗病毒脱除彻底，剥取茎尖易于操作，在促进甜樱桃产业健康持续发展方面具有广泛的应用价值。

主权项

一种甜樱桃砧木高效脱毒方法，包括步骤如下：1)建苗：取田间甜樱桃砧木叶芽作为组培用外植体，经消毒处理后接种在添加激素的MS建苗培养基中培养，获得组培苗；2)继代培养：将步骤1)获得的组培苗于MS增苗培养基中继代培养25～30天，3)热处理：将步骤2)继代培养后的组培苗于温度26～42℃、光强1000‑2000lx条件下培养25～40天；4)预培养、装载：将步骤3)热处理后的组培苗在超净工作台剥取1～2mm的茎尖组织，将茎尖组织预培养2～5天，然后经室温装载20～30min；5)玻璃化：装载后的茎尖组织转至冷冻保护溶液PVS2中冰浴处理60～90min，6)冷冻：玻璃化处理后的茎尖组织分装至冻存管中，将冷冻管迅速投入液氮中冷冻20～24h；7)冷冻后进行解冻，然后进行恢复处理1‑2次，然后进行诱导成苗；8)诱导成苗：恢复处理后的茎尖组织转至MS增苗培养基中先暗培养3～7天，再转入光照培养，成苗后继代培养，9)病毒检测：采用RT‑PCR检测待测苗PNRSV脱除效果，筛选出脱毒苗。