Recombinación homóloga mediada por nucleasas con dedos de zinc

摘要

Un método para introducir una secuencia exógena en el genoma de una célula de planta, comprendiendo el método las etapas de: (a) poner en contacto la célula con un vector de ADN donador que comprende una primera, segunda y quinta secuencias de ADN, y la quinta secuencia de ADN comprende la secuencia exógena del vector de ADN que se va a introducir y está interpuesta entre la primera y segunda secuencias del vector de ADN donador; en donde la primera secuencia tiene al menos de 90% a 95% de homología con una tercera secuencia en el genoma de la célula de planta, la segunda secuencia tiene al menos de 90% a 95% de homología con una cuarta secuencia en el genoma de la célula de planta, en donde la tercera y cuarta secuencias en el genoma de la célula de planta son secuencias de ADN cromosómico y los bordes cercanos de la tercera y cuarta secuencias están separados por al menos un par de nucleótidos; y (b) expresar una o más nucleasas en la célula, en donde la una o más nucleasas son cada una un par de proteínas de fusión, en donde cada proteína de fusión es una fusión entre el dominio de escisión de una endonucleasa de restricción FokI y un dominio de unión con dedos de zinc genéticamente modificado, y en donde la una o más nucleasas escinden el ADN cromosómico en una o más secuencias diana correspondientes entre la tercera y cuarta secuencias, en donde la una o más nucleasas escinden el ADN cromosómico en una localización de 0,4 a 3 kilopares de bases de la tercera o cuarta secuencias en el genoma de la célula de planta; de modo que la escisión del ADN cromosómico en la etapa (b) estimula la incorporación de la quinta secuencia de ADN en el genoma por recombinación homóloga.