一种柑桔衰退病毒全长侵染性克隆的构建方法及试剂盒

摘要

本发明公开了一种柑桔衰退病毒全长侵染性克隆的构建方法及试剂盒，属于生物技术领域。本发明针对柑桔衰退病毒分离株FS-577全序列，设计了6对特异性引物，这些引物的扩增区域涵盖了FS-577的全序列。将扩增片段经双酶切后依次插入到改造后的双元载体pUC119-Δ9后获得的全长侵染性克隆与野生型FS-577相比，在序列、侵染能力和寄主范围等性状上完全一致。利用该方法建立的试剂盒，包括有第一链cDNA合成、PCR扩增、双酶切缓冲液，以及链接反应缓冲液等，这些试剂盒可用于构建柑桔衰退病毒全长侵染性克隆。本发明为研究柑桔衰退病毒致病和蚜传等机理，以及柑桔衰退病防治提供了极其重要的技术平台。

主权项

一种用于构建柑桔衰退病毒全长侵染性克隆的试剂盒，其特征在于：包括柑桔衰退病毒分离株全序列扩增的6 对引物：引物1 上游引物序列ZYC214：5’‑CACTCGAGACAAACATCCCTGCCCAACGC‑3’；引物1 下游引物序列ZYC1293：5’‑GCAGGATCCGTCGTACAGGGATCGTAATTAC‑3’；引物2 上游引物序列ZYC749：5’‑AGTCCTCGAGAACCACTTAGTTGTTTAGCTATC‑3’；引物2 下游引物序列ZYC1894：5’‑GCCGCACTAGTATTTAAATTGGACCTATGTTGGCCCCCCATAGGGACAGTG‑3’；引物3 上游引物序列ZYC253：5’‑GTTCCGCATGCAGGAGTAAACACGTAGGTATGT‑3’；引物3 下游引物序列ZYC1436：5’‑AGCTCCATGGTGGGGAGAAACGGATCTTCAT‑3’；引物4 上游引物序列ZYC126：5’‑CTTACTACGCCAACGCGAGCC‑3’；引物4 下游引物序列ZYC1493：5’‑GAGCCCGCAGGACGCTGTGGAAAGATGCGT‑3’；引物5 上游引物序列ZYC431：5’‑GGTAGATCTAGCGCGGAACAATTTTTTTCA‑3’；引物5 下游引物序列ZYC1478：5’‑GCGGCTGCAGCTCGCAACCCGCCAGGA‑3’；引物6 上游引物序列ZYC2158：5’‑CGAACAGGTTCAATTTGTGAAATTCCTCTCCAAATGAAATG‑3’；引物6 下游引物序列ZYC114：5’‑CCGGAATTCAGGCAGCTTGGGAAAT‑3’。