一种检测脂肪酶酶活的纳米金比色法

摘要

本发明公开了一种在水溶液中快速、方便地检测脂肪酶酶活的比色分析法。本发明利用了纳米金具有高吸光系数的特点，将纳米金作为显色信号元件，同时吐温即作为脂肪酶的底物又作为纳米金稳定剂，抵抗高浓度盐离子。发展出一种具有成本低、操作简单、方便快捷的特点的比色分析法。本发明采用的吐温具有两亲性，无需乳化过程，且其稳定的纳米金很稳定，抵抗高浓度盐离子的能力很强，适宜推广应用。

主权项

一种检测脂肪酶酶活的纳米金比色法，其特征在于，使用纳米金作为信号元件，同时以吐温作为脂肪酶的底物兼纳米金稳定剂；具体包括如下步骤：(1)采用柠檬酸钠还原氯金酸制得酒红色纳米金溶液，(2)向步骤（1）中得到的纳米金溶液中加入吐温溶液对纳米金进行修饰；吐温溶液的浓度为3‑6 mmol/L，吐温溶液与纳米金溶液的体积比为1:100‑1:50，修饰时间为10‑60 min；(3)向修饰后的纳米金溶液中加入氯化钠溶液，使得经吐温稳定的纳米金处在盐溶液中，氯化钠的最终浓度为0.02‑0.1mol/L；(4)向步骤（3）中得到的纳米金溶液加入缓冲溶液进行pH的调节至pH值6‑8；后加入待测脂肪酶溶液，加入的待测脂肪酶溶液的最终浓度为0.15‑0.25 mg/ml，混匀，调节反应温度为30‑60℃，使纳米金表面的吐温被脂肪酶水解，纳米金重新暴露到盐溶液中发生聚集；对溶液进行检测，得到不同时间对应的紫外可见光谱，然后以吸光度比值E₆₂₀/E₅₂₀作为纵坐标，时间为横坐标，绘制脂肪酶酶活的动力学曲线。