一种标准化、高精度、通用的功能模块构建方法

摘要

本发明公开了一种标准化、高精度、通用的功能模块构建方法，包括如下步骤：（1）将源基因添加标准化位点形成基因元件，将基因元件连入质粒pLD-Blunt中形成带有基因元件的质粒，进行序列验证；（2）从带有基因元件的质粒中调取基因元件，连入模块工具质粒中的如下缺口：终止子1-启动子-AATG-缺口-TAAA-终止子2；构建出不同的功能模块的质粒；（3）从不同的功能模块的质粒中调取不同的功能模块，与经过酶切的酵母质粒载体共转化酿酒酵母，构建出标准化、高精度、通用的功能模块，存放于质粒中；本发明具有通用性、标准化、高精度、自由选择性。

主权项

一种标准化、高精度、通用的功能模块构建方法，包括如下步骤：（1）将源基因添加具有酶识别与切割功能的标准化位点形成基因元件，将基因元件连入质粒pLD‑Blunt中形成带有基因元件的质粒，进行序列验证；（2）设计需要组合发挥功能的基因元件先后顺序，按照设计的先后顺序从带有基因元件的质粒中利用所述标准化位点调取基因元件，利用Bsa1酶切割不同的模块工具质粒，形成如下缺口：终止子1‑启动子‑AATG‑缺口‑TAAA‑终止子2；将调取的不同的基因元件连入缺口，构建出不同的功能模块的质粒；所述不同的模块工具质粒是由不同的模块工具序列与空质粒pRS425K构成；所述模块工具序列为终止子1‑启动子‑AATGGGAGACC‑紫色荧光蛋白基因amilCP的表达盒‑GGTCTCCTAAA‑终止子2；（3）用下述两种方式之一种进行:方式一：从所述不同的功能模块的质粒中利用酶切调取不同的功能模块，与经过酶切的酵母质粒载体共转化酿酒酵母，使不同的功能模块组合在一起，构建出标准化、高精度、通用的功能模块，存放于质粒中；方式二：从所述不同的功能模块的质粒中利用酶切调取不同的功能模块，在第一个功能模块之前设置有左侧同源臂，在倒数第一个功能模块之后设置有右侧同源臂，共转化酿酒酵母，使不同的功能模块一同整合入酵母基因组，构建出标准化、高精度、通用的功能模块，其存放于基因组中。