SV40LT基因诱导构建T淋巴细胞模型及其细胞库

摘要

本发明涉及用于医学研究领域的SV40LT基因诱导T淋巴细胞模型及其细胞库的构建，其主要特征是按常规以T4DNA连接酶、BamHI、pcDNA3.1(-)DNA及SV40LTag DNA构建SV40LTag-pcDNA3.1(-)重组子、以感受态大肠杆菌纯化重组子、以脂质体转染法将其导入体外培养的T淋巴细胞，使重组子与细胞的DNA整合，以G418筛选的含阳性重组子的细胞，作传代、扩大培养，筛选细胞形态、细胞生长曲线、染色体核型、裸鼠致瘤试验、转染细胞DNA中SV40大T基因检测、mRNA表达产物测定及DNA序列测定结果符合永生化细胞生物特性者作为T淋巴细胞模型冻存于液氮中，以此构建SV40LT基因诱导T淋巴细胞模型及其细胞库，以建立在体外长期传代培养T淋巴细胞的方法并用于体外研究T淋巴细胞免疫机制。

主权项

一种用于医学研究领域的SV40LT基因诱导T淋巴细胞模型及其细胞库的构建，其主要特征是按常规以T4DNA连接酶、BamHI、pcDNA3.1(‑)DNA及SV40LTag DNA构建SV40LTag‑pcDNA3.1(‑)重组子、以感受态大肠杆菌纯化重组子、以脂质体转染法将其导入体外培养的T淋巴细胞，使重组子与细胞的DNA整合，以G418筛选的含阳性重组子的细胞，作传代、扩大培养，筛选细胞形态、细胞生长曲线、染色体核型、裸鼠致瘤试验、转染细胞DNA中SV40大T基因检测、mRNA表达产物测定及DNA序列测定结果符合永生化细胞生物特性者作为T淋巴细胞模型冻存于液氮中，以此构建SV40LT基因介导T淋巴细胞模型及其细胞库，以建立在体外长期传代培养T淋巴细胞的方法并用于体外(替代人体或动物直接试验)研究T淋巴细胞免疫机制。